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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Ni-NTI亲和层析纯化蛋白后如何处理
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demonhb

新虫 (小有名气)

[求助] Ni-NTI亲和层析纯化蛋白后如何处理 已有1人参与

亲和层析之后的镍树脂如何清洗，可不可以重复利用纯化不同的蛋白，如果能重复利用的话怎么处理？

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1楼 2017-04-13 11:37:15
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-14 07:50:53
demonhb: 金币+40, ★★★很有帮助 2017-04-14 12:18:46
看你用的是哪家的填料了。如果是GE的填料，纯化完毕之后直接用100mM EDTA, 500mM NaCl, pH8.0洗上10个以上柱体积，一直洗到检测不到蛋白为止。然后再用10体积的水洗去EDTA，最后用0.1M NiSO4重新挂上镍就可以留待下次再用了
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2楼2017-04-13 22:58:45
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demonhb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-04-13 22:58:45
看你用的是哪家的填料了。如果是GE的填料，纯化完毕之后直接用100mM EDTA, 500mM NaCl, pH8.0洗上10个以上柱体积，一直洗到检测不到蛋白为止。然后再用10体积的水洗去EDTA，最后用0.1M NiSO4重新挂上镍就可以留待下 ...

我用的是Qiagen的Ni-NTA agarose, 不知道步骤是不是和你说的一样

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3楼2017-04-14 08:33:49
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)
实验室用的预装柱 挺好用

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4楼2017-04-14 09:21:30
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by demonhb at 2017-04-14 08:33:49
我用的是Qiagen的Ni-NTA agarose, 不知道步骤是不是和你说的一样
...

具体看看Ni和填料的结合力怎么样，罗氏的填料就抗EDTA，再生步骤就不太一样。一般柱子加了EDTA变白了就说明可以用上面的流程。一般填料的说明书最后都会有CIP步骤（clean in peace），那个是彻底再生，比较麻烦。如果你发现柱子结合能力下降很厉害，就该彻底再生了。否则一般EDTA+NaCl都能解决问题
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5楼2017-04-14 23:07:40
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demonhb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-04-14 23:07:40
具体看看Ni和填料的结合力怎么样，罗氏的填料就抗EDTA，再生步骤就不太一样。一般柱子加了EDTA变白了就说明可以用上面的流程。一般填料的说明书最后都会有CIP步骤（clean in peace），那个是彻底再生，比较麻烦。如 ...

这个EDTA+NaCl指的是混合溶液吧

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6楼2017-04-16 00:00:58
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