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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 哪位好心的虫虫能帮我看看这样的DNA能用?
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huyx1970

铜虫 (初入文坛)

[交流] 哪位好心的虫虫能帮我看看这样的DNA能用?

提的DNA在4度冰箱里放了半年了，这是重新检测时跑的电泳图，哪位虫虫能帮我看看这样的DNA能否用?这样的带到底是怎么回事啊？是降解了吗？该怎样解决啊？如果重新提取的话，估计又得等半年多有了材料才能提取的啊，着急啊！！对了，DNA是用来做RAPD标记的。
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1楼 2009-01-02 22:57:50
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~
你这是点了多少微升跑的电泳啊
怎么这么亮
有的降解的比较严重
蛋白含量也比较高
那些主带很明显的还是可以用的
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2楼2009-01-02 23:08:12
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huyx1970

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by xiaoweiwei121 at 2009-1-2 23:08:
你这是点了多少微升跑的电泳啊
怎么这么亮
有的降解的比较严重
蛋白含量也比较高
那些主带很明显的还是可以用的

版主，希望再能帮助解答：譬如前三个泳道里的能用吗？还有，很奇怪的是，大部分样，我事先用分光光度计检测时OD比值是1.8-2.0，所以是经RNA酶消化后才跑的样。
这么亮的原因，我自己怀疑是DNA浓度太高，而没有稀释的原因。DNA浓度大约500-2000，点样时DNA为5ul。
希望您能再费心解答！辛苦了！！
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3楼2009-01-02 23:18:42
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,~
点样孔亮说明含蛋白杂质，拖带说明含糖酚杂质，总DNA一般不容易降解，所以，还是可能是DNA不是很纯；浓度大杂质当然就多，低浓度跑一下看看；做RAPD要求模板纯度不是很高，可以试一试。
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会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-01-03 01:07:11
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huyx1970

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2009-1-3 01:07:
点样孔亮说明含蛋白杂质，拖带说明含糖酚杂质，总DNA一般不容易降解，所以，还是可能是DNA不是很纯；浓度大杂质当然就多，低浓度跑一下看看；做RAPD要求模板纯度不是很高，可以试一试。

谢谢指点啊！今天再试试！顺祝新年如意！
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5楼2009-01-03 08:00:20
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spring0304

木虫 (小有名气)
拖带严重可能是DNA降解的太严重了
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6楼2009-01-03 12:44:20
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)
我也在做RAPD啊 ，我的ＤＮＡ在－２０放了半年　没啥事，你可以PCR试一下后面有啥问题可以交流啊　
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7楼2009-01-03 20:40:32
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huyx1970

铜虫 (初入文坛)
谢谢各位热心解答了。将DNA稀释了10倍重新跑过，除个别条带没跑出来外，其余的还跑出来了（如图）。虽有降解和其它大分子物质残留，但应该还能用来PCR吧。
祝各位实验顺利啊！
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8楼2009-01-04 08:06:47
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huyx1970

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by huyx1970 at 2009-1-4 08:06:
谢谢各位热心解答了。将DNA稀释了10倍重新跑过，除个别条带没跑出来外，其余的还跑出来了（如图）。虽有降解和其它大分子物质残留，但应该还能用来PCR吧。
祝各位实验顺利啊！

补充一点：有的条带浓是由于DNA模板没稀释到统一浓度啊。
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9楼2009-01-04 08:08:22
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cherry3862

银虫 (小有名气)
用作PCR没问题的，主带都很明显的，你提的是不是组织DNA啊？应该是不纯的DNA，我也遇到过这种情况，不影响试验。
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10楼2009-01-04 11:30:16
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