| 查看: 791 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
caiqingchong木虫 (著名写手)
|
[交流]
关于sacⅠ 和 EcoRⅠ双酶切的问题
|
||
|
这今天在克隆一个基因，大约1.7k，开始pcr完了后直接胶回收，双酶切，用的是MBI的酶，按照其网站的推荐，先在1x tango buffer里用Sac1酶切一段时间后，再加buffer至2x，同时加一定量的 EcoRⅠ，再酶切一段时间（网站要求酶切1h，而我延长至数倍），在胶回收跑电泳时发现，那个溴酚蓝的指示带扩散非常厉害，而DNA片段扩散也很严重，根本无法回收，做了几次都这样，排除了凝胶、上样buffer等原因，因为回收其他的都很好。 几天又直接把DNA片段连接到了PMD-T载体上，提质粒后用上面的方法双酶切胶回收，还是一样的问题，溴酚蓝和DNA扩散的都很严重，到底是什么原因啊，是酶切时间太长了吗，还是怎么回事？ 碰到此问题或懂行的xdjm来解释或分析一下，谢谢了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有11人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有11人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有13人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有14人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有11人回复
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2009-01-01 15:52:08
caiqingchong
木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2512.6
- 散金: 15
- 红花: 7
- 帖子: 1793
- 在线: 288.5小时
- 虫号: 264514
- 注册: 2006-07-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
3楼2009-01-01 16:09:18
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
4楼2009-01-01 16:28:28
