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安静的位置i

金虫 (小有名气)

[交流] 关于基因片段插入位点的问题!

我用的质粒上能够使用的酶切位点非常有限,目前想插入一个片段,只有两个酶切位点可用于双酶切后再连接(没有其他选择),但是其中一个位点在我的目的片段上也存在!怎么能解决这个问题啊?请高人指点!
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2009/1/3, 01:09:
用Gateway试剂盒,省很多麻烦

[ Last edited by sutao1979 on 2009-1-3 at 01:12 ]

但要质粒有那两个位点才行
是很方便~~~
9楼2009-01-03 09:54:27
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与!
提供一个思路,你用这两个酶来切,在你的基因片段前加上这两个酶切位点,做一个酶的梯度实验,酶切的时候,有可能出现三种情况,一是两个都切开,其次是分别切开其中的一个位点,这时根据你的基因大小判断你酶切目的条带的大小,你酶切回收你的产物
帮助虫友,提升自己
2楼2009-01-01 13:53:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与!
那还不如单酶切来得实际
切完测个序确定方向就好了,简单
50%的机会嘛~~
第一天酶切,连接,转化
第二天挑单克隆摇菌,叫人拿测序
然后再等3天
结果就出来了
3楼2009-01-01 15:41:49
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MAIZE

我赞同用单酶切来的实际,载体单酶切后去磷酸化,连片断,然后寻找基因内部我载体上的酶切位点来确定方向。
4楼2009-01-02 16:49:29
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