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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助
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nicegreat

新虫 (小有名气)

[求助] 求助 已有2人参与

保存在T载体上的基因两端有BamH I和sac I两个酶切位点，要与pet32a载体连接，现在为什么要设计引物改造酶切位点，pet32a上不是有这两个酶切位点吗？怎么不能直接连接？

求助


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1楼 2017-04-06 12:01:37
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知了啊啊

新虫 (初入文坛)
是不是直接连接方向不对呀？按说是可以直接连的啊。

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2楼2017-04-06 13:33:10
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-06 20:45:14
可能靠的太近了， 双酶切切不动
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nicegreat
与人玫瑰手有余香
3楼2017-04-06 15:41:21
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-06 20:45:30
可能的原因：方向、翻译框、位点太近
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4楼2017-04-06 18:46:28
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
还要考虑会不会移码突变

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5楼2017-04-06 21:45:11
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kungfu2016

新虫 (正式写手)
NcoI不对框，蛋白质翻译会错位

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6楼2017-04-06 22:32:14
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nicegreat

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 路人甲007 at 2017-04-06 15:41:21
可能靠的太近了， 双酶切切不动

由于两个酶切位点太近，如何判断发生了双酶切还是单酶切呢？谢谢啦

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7楼2017-04-07 12:56:32
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
引用回帖:
7楼: Originally posted by nicegreat at 2017-04-07 12:56:32
由于两个酶切位点太近，如何判断发生了双酶切还是单酶切呢？谢谢啦
...

好像判断不出来
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nicegreat
与人玫瑰手有余香
8楼2017-04-07 14:50:53
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nicegreat

新虫 (小有名气)
请问各位，目的基因连接载体转化后菌液PCR也可以得到目的条带，为什么提取的质粒大小不对呢？

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9楼2017-04-12 21:40:37
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nicegreat

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 路人甲007 at 2017-04-07 14:50:53
好像判断不出来...

请问，目的基因连接载体转化后菌液PCR也可以得到目的条带，为什么提取的质粒大小不对呢？
求助-1



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10楼2017-04-13 09:42:44
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