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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 仅用LB-Amp平板，不用IPTG 和 X-gal 如何筛选菌落?? 请解答啊
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xuhuichen

银虫 (正式写手)

[求助] 仅用LB-Amp平板，不用IPTG 和 X-gal 如何筛选菌落?? 请解答啊 已有1人参与

在做DGGE时，切胶回收后的条带需进行TＡ克隆提高其测序效率, 将纯化后的 PCR扩增产物与 pGEM-T Easy Vector 克隆载体连接、转化 E.coli DH5α感受态细胞。利用涂布了 IPTG 和 X-gal 的 LB 平板（氨苄青霉素），“蓝白斑”筛选阳性克隆。
      我想请问如果不蓝白斑筛选，只在LB 平板（氨苄青霉素）上做筛选，步骤是怎样的呢？筛选什么样的菌落才合适呢？@hc-material@gyesang
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1楼 2017-04-05 19:10:12
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-04-06 00:52:00
做板子的时候Amp用量加倍，涂上去长过夜，随便挑克隆就行，可以多挑几个一起验证。我基本上就没用过蓝白斑筛选，觉得麻烦

我也是这么搞

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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
4楼2017-04-06 16:47:48
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuhuichen: 金币+15, ★★★很有帮助 2017-04-06 08:56:19
做板子的时候Amp用量加倍，涂上去长过夜，随便挑克隆就行，可以多挑几个一起验证。我基本上就没用过蓝白斑筛选，觉得麻烦
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2楼2017-04-06 00:52:00
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xuhuichen

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-04-06 00:52:00
做板子的时候Amp用量加倍，涂上去长过夜，随便挑克隆就行，可以多挑几个一起验证。我基本上就没用过蓝白斑筛选，觉得麻烦

非常感谢，我还有疑问，Amp用量加倍，量多少合适呢？加多了会抑制生长的吧。随便挑克隆就行指的是挑取不同菌落形态的吗，代表不同的菌？怎么验证呢？
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3楼2017-04-06 08:49:54
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuhuichen at 2017-04-06 08:49:54
非常感谢，我还有疑问，Amp用量加倍，量多少合适呢？加多了会抑制生长的吧。随便挑克隆就行指的是挑取不同菌落形态的吗，代表不同的菌？怎么验证呢？...

你难道不做pcr验证和测序么？

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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
5楼2017-04-06 16:48:57
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