24小时热门版块排行榜    

查看: 2793  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xuhuichen

银虫 (正式写手)

[求助] 仅用LB-Amp平板,不用IPTG 和 X-gal 如何筛选菌落?? 请解答啊已有1人参与

在做DGGE时,切胶回收后的条带需进行TA克隆提高其测序效率, 将纯化后的 PCR扩增产物与 pGEM-T Easy Vector 克隆载体连接、转化 E.coli DH5α感受态细胞。利用涂布了 IPTG 和 X-gal 的 LB 平板(氨苄青霉素),“蓝白斑”筛选阳性克隆。
      我想请问如果不蓝白斑筛选,只在LB 平板(氨苄青霉素)上做筛选,步骤是怎样的呢?筛选什么样的菌落才合适呢?@hc-material@gyesang
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-04-06 00:52:00
做板子的时候Amp用量加倍,涂上去长过夜,随便挑克隆就行,可以多挑几个一起验证。我基本上就没用过蓝白斑筛选,觉得麻烦

我也是这么搞

发自小木虫Android客户端
我选择,我喜欢;我喜欢我的选择。
4楼2017-04-06 16:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xuhuichen: 金币+15, ★★★很有帮助 2017-04-06 08:56:19
做板子的时候Amp用量加倍,涂上去长过夜,随便挑克隆就行,可以多挑几个一起验证。我基本上就没用过蓝白斑筛选,觉得麻烦
2楼2017-04-06 00:52:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuhuichen

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-04-06 00:52:00
做板子的时候Amp用量加倍,涂上去长过夜,随便挑克隆就行,可以多挑几个一起验证。我基本上就没用过蓝白斑筛选,觉得麻烦

非常感谢,我还有疑问,Amp用量加倍,量多少合适呢?加多了会抑制生长的吧。随便挑克隆就行指的是挑取不同菌落形态的吗,代表不同的菌?怎么验证呢?
3楼2017-04-06 08:49:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xuhuichen at 2017-04-06 08:49:54
非常感谢,我还有疑问,Amp用量加倍,量多少合适呢?加多了会抑制生长的吧。随便挑克隆就行指的是挑取不同菌落形态的吗,代表不同的菌?怎么验证呢?...

你难道不做pcr验证和测序么?

发自小木虫Android客户端
我选择,我喜欢;我喜欢我的选择。
5楼2017-04-06 16:48:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见