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Ni柱(IMAC-NI-charged cartridges)纯化蛋白
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张亿渠
铁虫
(初入文坛)
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在线: 3.2小时
虫号: 4560461
注册: 2016-03-31
性别: GG
专业: 昆虫学
[
求助
]
Ni柱(IMAC-NI-charged cartridges)纯化蛋白
已有1人参与
各位大神,请教一下。我的蛋白是20kDa左右,用Ni柱(IMAC-NI-charged cartridges)纯化蛋白。
图1 是我第一次用这个ni柱纯化的结果,图2 是第二次用这个柱子纯化结果(中间没清晰,因为产品说可以用3次后才要清洗)。图3 是图2 跑胶的原图
①问题一:这两次比较起来是不是那个柱子问题?是不要清洗一下,各位大神知道这个怎么清洗?
跑sds-page时,如图2 前面还是比较好的,但是跑到后面图就开始弯曲了,不在同一条线。
②问题二:这个是因为什么原因才让它变弯的,而且(图3)还有很长的拖尾(是不是因我在跑浓缩胶时间过长了,我是用5%浓缩胶,在80V跑了30MIN)
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1楼
2017-04-04 16:37:36
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hhsy
新虫
(初入文坛)
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虫号: 5007720
注册: 2016-09-12
专业: 生物化学
胶凝固的不是太好,另外上样前尽量短暂地离心一下,防止有不融颗粒
发自小木虫IOS客户端
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2楼
2017-05-18 15:36:41
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木虫
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金币: 1538.3
帖子: 61
在线: 16.4小时
虫号: 2079015
注册: 2012-10-22
专业: 微生物资源与分类学
【答案】应助回帖
问题一,应该不是你的柱子不干净造成的。NI柱彻底清洗方法:脱ni,走水,1.5M氯化钠清洗,走水,1m氢氧化钠清洗,走水,挂ni,再走水,再平衡。 如果是一般清洗,就用100%B液清洗,然后走水,再A液平衡就可以了。
问题二,图二会变完应该是你的胶没配好吧,或者没放水平。个人浅见····
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3楼
2018-04-20 10:08:23
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