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张亿渠

铁虫 (初入文坛)

[求助] Ni柱(IMAC-NI-charged cartridges)纯化蛋白 已有1人参与

各位大神,请教一下。我的蛋白是20kDa左右,用Ni柱(IMAC-NI-charged cartridges)纯化蛋白。
图1  是我第一次用这个ni柱纯化的结果,图2  是第二次用这个柱子纯化结果(中间没清晰,因为产品说可以用3次后才要清洗)。图3  是图2  跑胶的原图
①问题一:这两次比较起来是不是那个柱子问题?是不要清洗一下,各位大神知道这个怎么清洗?
跑sds-page时,如图2  前面还是比较好的,但是跑到后面图就开始弯曲了,不在同一条线。
②问题二:这个是因为什么原因才让它变弯的,而且(图3)还有很长的拖尾(是不是因我在跑浓缩胶时间过长了,我是用5%浓缩胶,在80V跑了30MIN)

Ni柱(IMAC-NI-charged cartridges)纯化蛋白
1.png


Ni柱(IMAC-NI-charged cartridges)纯化蛋白-1
2.png


Ni柱(IMAC-NI-charged cartridges)纯化蛋白-2
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hhsy

新虫 (初入文坛)

胶凝固的不是太好,另外上样前尽量短暂地离心一下,防止有不融颗粒

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-05-18 15:36:41
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154632599

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

问题一,应该不是你的柱子不干净造成的。NI柱彻底清洗方法:脱ni,走水,1.5M氯化钠清洗,走水,1m氢氧化钠清洗,走水,挂ni,再走水,再平衡。 如果是一般清洗,就用100%B液清洗,然后走水,再A液平衡就可以了。
问题二,图二会变完应该是你的胶没配好吧,或者没放水平。个人浅见····
3楼2018-04-20 10:08:23
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