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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Ni柱（IMAC-NI-charged cartridges）纯化蛋白
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张亿渠

铁虫 (初入文坛)

[求助] Ni柱（IMAC-NI-charged cartridges）纯化蛋白 已有1人参与

各位大神，请教一下。我的蛋白是20kDa左右，用Ni柱（IMAC-NI-charged cartridges）纯化蛋白。
图1  是我第一次用这个ni柱纯化的结果，图2  是第二次用这个柱子纯化结果（中间没清晰，因为产品说可以用3次后才要清洗）。图3  是图2  跑胶的原图
①问题一：这两次比较起来是不是那个柱子问题？是不要清洗一下，各位大神知道这个怎么清洗？
跑sds-page时，如图2  前面还是比较好的，但是跑到后面图就开始弯曲了，不在同一条线。
②问题二：这个是因为什么原因才让它变弯的，而且（图3）还有很长的拖尾（是不是因我在跑浓缩胶时间过长了，我是用5%浓缩胶，在80V跑了30MIN）

Ni柱（IMAC-NI-charged cartridges）纯化蛋白
1.png


Ni柱（IMAC-NI-charged cartridges）纯化蛋白-1
2.png


Ni柱（IMAC-NI-charged cartridges）纯化蛋白-2
3
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1楼 2017-04-04 16:37:36
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hhsy

新虫 (初入文坛)
胶凝固的不是太好，另外上样前尽量短暂地离心一下，防止有不融颗粒

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2楼2017-05-18 15:36:41
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154632599

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

问题一，应该不是你的柱子不干净造成的。NI柱彻底清洗方法：脱ni，走水，1.5M氯化钠清洗，走水，1m氢氧化钠清洗，走水，挂ni，再走水，再平衡。 如果是一般清洗，就用100%B液清洗，然后走水，再A液平衡就可以了。
问题二，图二会变完应该是你的胶没配好吧，或者没放水平。个人浅见····
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3楼2018-04-20 10:08:23
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