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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌全细胞 ELISA 实验方法
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边木殇

木虫 (小有名气)

[求助] 细菌全细胞 ELISA 实验方法 已有1人参与

最近在做毛滴虫和支原体的表面抗原与抗体筛选实验，用的全细胞10^6每孔，50nM NaHCO3缓冲液 4度过夜包被96板，之后过程跟indirect ELISA 一样。但是结果OD值很低，怀疑细胞没有包被到板子上，或者中间洗板的时候掉了很多。所以想求个细菌全细胞 ELISA 实验方法！！！
ps. 不想要超声裂解细胞碎片的方法，只要细胞表面蛋白坐抗原， 所以尽量保持细胞完整性
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1楼 2017-04-03 16:57:23
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边木殇

木虫 (小有名气)
自己顶下，哪位好心人能帮我一下
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2楼2017-04-17 08:37:17
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

您好！我们也打算这样做，但是针对您的那个问题，我在想：
1）您说OD值很低，是有多低呢？足够说明效价存在的吗？可不可以把细胞的量再加高一个数量级试试包被效果呢？
2）有没有可能您那边使用的抗体是活性比较低，所以导致OD值低呢？或者有没有质控的比较；
3）我这边有一个做白念的经历，发现超声对表面蛋白的影响不大，所以建议您还是超声毛滴虫的细胞后，再包被试试看；
个人分析观点，仅供参考。谢谢
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Orbetterit,orenjoyit!
3楼2017-04-18 16:47:36
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pengmengwen

铁虫 (小有名气)
你的抗体是什么呢

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快乐生活
4楼2017-04-19 12:31:56
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1273651598
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发自小木虫IOS客户端
5楼2017-04-19 16:24:22
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QQ小木屋
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发自小木虫Android客户端
6楼2017-04-19 22:18:15
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边木殇

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jfj_tj at 2017-04-18 16:47:36
您好！我们也打算这样做，但是针对您的那个问题，我在想：
1）您说OD值很低，是有多低呢？足够说明效价存在的吗？可不可以把细胞的量再加高一个数量级试试包被效果呢？
2）有没有可能您那边使用的抗体是活性比较 ...

你好，我第一次的结果大部分OD值0.1~0.15，第二次做有几个效果还行但OD值也才0.4左右，包被量提高2个数量级反而OD值更低了。抗体是噬菌体抗体库。
做超声的话有个疑问，就是超声的时候会把表面蛋白也震碎吗？并且担心内膜蛋白也会影响实验结果。如果没有其他好办法只能先做超声了
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7楼2017-04-25 09:32:01
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边木殇

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pengmengwen at 2017-04-19 12:31:56
你的抗体是什么呢

我用的单链噬菌体抗体库做抗体
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8楼2017-04-25 09:32:49
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苏菲罗斯

银虫 (初入文坛)
细胞直接做很困难容易洗掉，不如破碎了用细胞膜碎片试试看
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9楼2019-07-18 14:25:19
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