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边木殇

木虫 (小有名气)

[求助] 细菌全细胞 ELISA 实验方法 已有1人参与

最近在做毛滴虫和支原体的表面抗原与抗体筛选实验,用的全细胞10^6每孔,50nM NaHCO3缓冲液 4度过夜包被96板,之后过程跟indirect ELISA 一样。但是结果OD值很低,怀疑细胞没有包被到板子上,或者中间洗板的时候掉了很多。所以想求个细菌全细胞 ELISA 实验方法!!!
ps. 不想要超声裂解细胞碎片的方法,只要细胞表面蛋白坐抗原, 所以尽量保持细胞完整性
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边木殇

木虫 (小有名气)

自己顶下,哪位好心人能帮我一下
2楼2017-04-17 08:37:17
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

您好!我们也打算这样做,但是针对您的那个问题,我在想:
1)您说OD值很低,是有多低呢?足够说明效价存在的吗?可不可以把细胞的量再加高一个数量级试试包被效果呢?
2)有没有可能您那边使用的抗体是活性比较低,所以导致OD值低呢?或者有没有质控的比较;
3)我这边有一个做白念的经历,发现超声对表面蛋白的影响不大,所以建议您还是超声毛滴虫的细胞后,再包被试试看;
个人分析观点,仅供参考。谢谢
Orbetterit,orenjoyit!
3楼2017-04-18 16:47:36
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pengmengwen

铁虫 (小有名气)

快乐生活
4楼2017-04-19 12:31:56
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5楼2017-04-19 16:24:22
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6楼2017-04-19 22:18:15
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边木殇

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jfj_tj at 2017-04-18 16:47:36
您好!我们也打算这样做,但是针对您的那个问题,我在想:
1)您说OD值很低,是有多低呢?足够说明效价存在的吗?可不可以把细胞的量再加高一个数量级试试包被效果呢?
2)有没有可能您那边使用的抗体是活性比较 ...

你好,我第一次的结果大部分OD值0.1~0.15,第二次做有几个效果还行但OD值也才0.4左右,包被量提高2个数量级反而OD值更低了。抗体是噬菌体抗体库。
做超声的话有个疑问,就是超声的时候会把表面蛋白也震碎吗?并且担心内膜蛋白也会影响实验结果。如果没有其他好办法只能先做超声了
7楼2017-04-25 09:32:01
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边木殇

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by pengmengwen at 2017-04-19 12:31:56
你的抗体是什么呢

我用的单链噬菌体抗体库做抗体
8楼2017-04-25 09:32:49
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苏菲罗斯

银虫 (初入文坛)

细胞直接做很困难容易洗掉,不如破碎了用细胞膜碎片试试看
9楼2019-07-18 14:25:19
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