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哦嗯啊

新虫 (初入文坛)

[交流] PC3.1插入一个1200bp的片段怎么都不成功,求助 已有4人参与

如题,想在PC3.1上插入一个1200bp的片段
PC3.1和目的片段用Not1和Xoh1双酶切2小时,PC3.1 5’断还去磷酸化
胶回收的时候显示的条带大小和亮度都非常好了
16度连接过夜
转化到大肠杆菌之后,经过抗性筛选长出来好几十个菌落,但是菌落PCR,只看见引物二聚体,用的引物一个是通用引物,一个是自己的引物
为什么,每一次都是假阳性
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Janual

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
对片段来说,切的时间短了。

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-03-31 15:48:58
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dragonhmw

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不用去磷酸化了,会降低链接效率

发自小木虫Android客户端
3楼2017-03-31 22:44:05
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dhmdddd

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PCR出问题了?做个阴性阳性对照,或者试下提质粒酶切验证,祝好

发自小木虫Android客户端
上班族,学习ing……
4楼2017-03-31 23:32:07
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哦嗯啊

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dragonhmw at 2017-03-31 22:44:05
不用去磷酸化了,会降低链接效率

为什么去磷酸化会降低连接效率
5楼2017-04-05 21:51:49
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爱萌的小天使

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
很多情况P出来引物二聚体是酶的问题,我之前用的rTaq,后来换了新的ExTaq就P出来了,而且全是阳性的
6楼2017-04-21 13:57:38
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