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sll907519257

新虫 (初入文坛)
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我有一个带his标签的载体，倒入到BL21里面，求如何诱导纯化蛋白，求大神解答

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1楼 2017-03-30 00:13:07
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落雪6

铁杆木虫 (正式写手)
★
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先应该是iptg诱导表达，然后超声破碎，sds_page确认表达的蛋白是可溶性的，还是包涵体，然后上镍柱纯化，包涵体的话还有复性的过程。纯化的过程可以参考镍柱说明书！

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22楼2017-03-30 00:21:56
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medi812

新虫 (初入文坛)
★
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能不能表达也取决于你的质粒和宿主 你要是用了带有T7系统的质粒 常见是pET质粒 你就必须用带有DE3的宿主 比如BL21（DE3） 不然是无法表达的

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23楼2017-03-30 05:19:25
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medi812

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
纯化用his的好处是快速 可以scale up 缺点是纯度差 下游需要离子交换进一步纯化 亲和用镍柱子或者树脂 洗脱用咪唑

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24楼2017-03-30 05:21:40
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gqcumt20152楼
2017-03-30 00:13   回复  
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吃饭带钱了3楼
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tys84374楼
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streamkite5楼
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玉奇哥哥6楼
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chenyu0137楼
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栀子行8楼
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mochenmi9楼
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zy13141510楼
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江南的竹11楼
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dwq200612楼
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yqlatweb13楼
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此生不换914楼
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今日默书15楼
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启程Leonardo16楼
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肉猫猫17楼
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小蜗牛_19楼
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SYSU_wangq20楼
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含能材料21楼
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