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sll907519257
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我有一个带his标签的载体,倒入到BL21里面,求如何诱导纯化蛋白,求大神解答
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2017-03-30 00:13:07
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落雪6
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
先应该是iptg诱导表达,然后超声破碎,sds_page确认表达的蛋白是可溶性的,还是包涵体,然后上镍柱纯化,包涵体的话还有复性的过程。纯化的过程可以参考镍柱说明书!
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22楼
2017-03-30 00:21:56
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medi812
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
能不能表达也取决于你的质粒和宿主 你要是用了带有T7系统的质粒 常见是pET质粒 你就必须用带有DE3的宿主 比如BL21(DE3) 不然是无法表达的
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23楼
2017-03-30 05:19:25
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medi812
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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
纯化用his的好处是快速 可以scale up 缺点是纯度差 下游需要离子交换进一步纯化 亲和用镍柱子或者树脂 洗脱用咪唑
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24楼
2017-03-30 05:21:40
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gqcumt2015
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吃饭带钱了
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tys8437
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streamkite
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玉奇哥哥
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chenyu013
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栀子行
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zy131415
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江南的竹
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dwq2006
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yqlatweb
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此生不换9
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今日默书
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肉猫猫
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贱人丶松锅
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小蜗牛_
19楼
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SYSU_wangq
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含能材料
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