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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 质粒构建
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fighting～～

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒构建 已有2人参与

最近一直在做购质粒，但是涂板挑了单克隆以后测序发现全部都是空载 不知道为啥一直没有连接上

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1楼 2017-03-29 22:47:26
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飞沙狼烟

新虫 (正式写手)
你的思路是什么？中间载体是什么？PCR类型？

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爱拼才会赢！
2楼2017-03-29 23:24:07
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csunny521

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2017-03-29 23:25:49
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fighting～～

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞沙狼烟 at 2017-03-29 23:24:07
你的思路是什么？中间载体是什么？PCR类型？

我有一个真核质粒 现在在构原核 载体用的pet-28a 我在真核里面p出我的目的片段 然后做的酶切连接转化

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4楼2017-03-30 10:07:19
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fighting～～

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by csunny521 at 2017-03-29 23:25:49
可以先做个菌落PCR鉴定下看看

我连接以后跑胶看了的 连接上了但是不是很深 但不知为什么菌落挑的几个都是空载

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5楼2017-03-30 10:08:32
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孔飞东落

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-30 22:41:37
对于不是很亮的带  我觉得还是重新做比较好，这样的话才能排除这个因素，后面判断才能更清楚。
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6楼2017-03-30 18:54:12
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小苦孩纸

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-30 22:41:49
你连接的时候要做个空载体的对照，如果对照组也长菌了，那就说明连接的是载体
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7楼2017-03-30 20:54:30
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邹忌

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你可以把你的构建思路发上来看看，来看看你的设计是否有问题的，这样会好一点
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不是不能，只是不想
8楼2017-04-02 09:47:36
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江边鸟

银虫 (小有名气)
感受态确定没问题吗？

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9楼2017-04-02 11:01:07
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