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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酶切
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纪孟君

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切 已有4人参与

大神们，我的载体是14000bp，用双酶切切过夜，应该是一个13000左右，一个900左右，可怎么都切不下来，有啥办法吗？？？

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大雨也要等到晴朗
1楼 2017-03-28 15:13:53
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是选用的什么酶，buffer兼容吗？
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与人玫瑰手有余香
2楼2017-03-28 22:22:51
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纪孟君

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 路人甲007 at 2017-03-28 22:22:51
你是选用的什么酶，buffer兼容吗？

buffer是在通用表上查的，bamh1和xho1

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大雨也要等到晴朗
3楼2017-03-28 22:35:49
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

麻烦你说一下你用的酶的具体的信息吧。
还有你的意思是把14000切开成13000和900bp吧，有一种可能是14000和13000跑胶条带靠的很近，分的不开，900相对会很弱。你切了多少质粒
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与人玫瑰手有余香
4楼2017-03-28 22:52:47
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yanyaqin

新虫 (小有名气)
分步酶切试一下，有可能buffer不合适

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找一个平凡的人，过一段简单的人生！
5楼2017-03-29 00:01:33
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-29 07:42:33
重新摇菌提个质粒，每一步都静置两分钟，然后空离心5分钟，超净台吹5分钟。如果有多个克隆，可以都提点。不知道你用哪个公司的酶，我们用neb得，我确定它们的buf兼容，你可以加大酶和质粒的用量，用小号或者中号的梳子孔电泳。祝好运。

成功了记得告诉我们。

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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
6楼2017-03-29 01:48:51
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-29 07:43:00
如果还切不下来，建议重新做克隆，连接，测序。

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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
7楼2017-03-29 01:50:38
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纪孟君

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2017-03-29 01:48:51
重新摇菌提个质粒，每一步都静置两分钟，然后空离心5分钟，超净台吹5分钟。如果有多个克隆，可以都提点。不知道你用哪个公司的酶，我们用neb得，我确定它们的buf兼容，你可以加大酶和质粒的用量，用小号或者中号的梳 ...

我的buffer也兼容，但还是没切开，直接回收了载体片段

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大雨也要等到晴朗
8楼2017-04-23 10:46:52
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