24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 992  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

可以吗

银虫 (小有名气)

[交流] 用过NdeⅠ和XhoⅠ的帮帮忙啊

我打算用NdeⅠ和XhoⅠ这两个酶做双酶切,但是据说这两个酶酶切效率和连接效率都很低,请问
1.   这两个酶能同时做双切吗?还是要单独切?
2.   酶切时的酶和载体的量是多少?温度、时间呢?
3.   这两个酶切后vector和外源基因的比例是多少?时间?温度?


总之,有用过的就进来讲讲经验吧,希望能使试验进行顺利一些,谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可以吗

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by kinase at 2008-12-30 19:51:
我们实验室最常用的内切酶就是这两个,我们基本上80%的克隆都是用的是这两个酶,而且我们是混着用的,用的是NEB的NdeI,TAKARA的XhoI,buffer一般用TAKARA的bufferH,加BSA(BSA用NEB的还是TAKARA的都没有关系,注 ...

请问你们用了什么保护碱基?
7楼2008-12-31 13:39:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

Double Digest Recommendation(s) for NdeI + XhoI:
Digest in NEBuffer 4 + BSA at 37°C.


NEB的建议
NEB的酶很少有所谓的效率低的问题
根据酶活定义,1个单位的酶1小时消化1ug DNA
具体的酶切条件看说明书
Vector和insert的比例你是说连接的时候吗?
一般是1:3~1:10,我喜欢1:5(摩尔比)
连接也用好一点的酶,没有所谓的连不上的
不要用takara的任何工具酶,要买就买NEB的
2楼2008-12-29 23:01:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

andyhu2001

银虫 (小有名气)

可以查一查takara的产品手册,上面有反应温度等条件,特别注意两个酶的反应温度是否一致
但行好事,莫问前程!
3楼2008-12-29 23:09:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kinase

铁虫 (著名写手)

我们实验室最常用的内切酶就是这两个,我们基本上80%的克隆都是用的是这两个酶,而且我们是混着用的,用的是NEB的NdeI,TAKARA的XhoI,buffer一般用TAKARA的bufferH,加BSA(BSA用NEB的还是TAKARA的都没有关系,注意他们两家公司的储液浓度是不一样的),50ul的体系里,各加1ul,37度3小时,完全没有问题啊。
5楼2008-12-30 19:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +10 junqihahaha 2026-03-26 11/550 2026-03-27 01:15 by yhmsz
[考研] 349求调剂 +5 杰斯塔里斯 2026-03-21 5/250 2026-03-27 00:31 by wxiongid
[考研] 311求调剂 +5 lin0039 2026-03-26 5/250 2026-03-26 22:43 by 学员8dgXkO
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +4 李轶男003 2026-03-20 4/200 2026-03-26 16:05 by 哇啦啦啦xtj
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +4 SYA! 2026-03-23 4/200 2026-03-26 15:27 by caiaijun80
[考研] 材料277求调剂 +5 min3 2026-03-24 5/250 2026-03-26 15:13 by zzll406
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +5 曼111 2026-03-24 6/300 2026-03-26 13:04 by 13756423260
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 070300,一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见