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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR拖尾
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想起旎

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR拖尾 已有1人参与

我在做PCR时出现严重拖尾现象，不知道是怎么回事，请高手指点
? ?我的目的片段大约为700bp，利用的反应体系如下：
94 度，5分钟
94 度? ???30 秒
60 度? ? 30 秒
72??度? ?45 秒? ??
30个循环
72 度7分钟

PCR拖尾


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1楼 2017-03-27 10:07:42
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布za

铜虫 (初入文坛)
可能模板不纯

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2楼2017-03-27 19:26:04
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凌树枯草

新虫 (初入文坛)
加的引物等反应组分太多了吧

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3楼2017-03-27 20:35:14
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艰苦温度

新虫 (小有名气)
模版质量不好

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4楼2017-03-27 23:21:30
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h8w67p

新虫 (初入文坛)
模板可能破裂

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5楼2017-03-28 00:14:12
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姜三胖

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-28 07:44:25
模板浓度过高会导致拖带，进行稀释或少加点模板

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6楼2017-03-28 00:35:43
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chenshuai1238

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-30 22:40:09
可以考虑手动hot-start进行pcr，也就是在体系温度达到98度的时候，再往里面加酶，可以减少很多碎片序列的产生
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7楼2017-03-29 11:18:30
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)
退火温度升两度，或者多加几个循环

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8楼2017-03-29 15:48:46
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古格银眼007

铜虫 (初入文坛)
模板质量不好吧
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9楼2017-03-30 21:31:21
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lihopcr

新虫 (初入文坛)
图片拍的太糊了

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10楼2017-04-05 08:21:37
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