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想起旎

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR拖尾 已有1人参与

我在做PCR时出现严重拖尾现象,不知道是怎么回事,请高手指点
? ?我的目的片段大约为700bp,利用的反应体系如下:
94 度,5分钟
94 度? ???30 秒
60 度? ? 30 秒
72??度? ?45 秒? ??
30个循环
72 度7分钟

PCR拖尾


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布za

铜虫 (初入文坛)

2楼2017-03-27 19:26:04
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凌树枯草

新虫 (初入文坛)

加的引物等反应组分太多了吧

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3楼2017-03-27 20:35:14
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艰苦温度

新虫 (小有名气)

4楼2017-03-27 23:21:30
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h8w67p

新虫 (初入文坛)

5楼2017-03-28 00:14:12
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姜三胖

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-28 07:44:25
模板浓度过高会导致拖带,进行稀释或少加点模板

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6楼2017-03-28 00:35:43
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chenshuai1238

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-30 22:40:09
可以考虑手动hot-start进行pcr,也就是在体系温度达到98度的时候,再往里面加酶,可以减少很多碎片序列的产生
7楼2017-03-29 11:18:30
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

退火温度升两度,或者多加几个循环

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8楼2017-03-29 15:48:46
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古格银眼007

铜虫 (初入文坛)

模板质量不好吧
9楼2017-03-30 21:31:21
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lihopcr

新虫 (初入文坛)

10楼2017-04-05 08:21:37
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