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wjgsunny

金虫 (正式写手)

[交流] 液相色谱柱柱压很高怎么办啊?

我们用的ultimate 250mm 的C18液相色谱柱,发现现在柱压非常高怎么办啊?现在不能换柱子,因为已经做了一部分数据!流动相用的是CH3OH-0.2%HAc(H2O),就是样品的粘度有点大,但是所有的样品均溶于甲醇和水。
   我用异丙醇(色谱级)活化过2h(0.2ml/min),然后用甲醇冲洗了一晚上(0.2ml/min),今天开机柱压仍然很高,快到24Mpa了!真的是痛苦!
   各位有什么办法吗?
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xuefang818

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wjgsunny at 2008-12-29 10:28:13:
我们用的ultimate 250mm 的C18液相色谱柱,发现现在柱压非常高怎么办啊?现在不能换柱子,因为已经做了一部分数据!流动相用的是CH3OH-0.2%HAc(H2O),就是样品的粘度有点大,但是所有的样品均溶于甲醇和水。
   我 ...

压力高简单的讲就是堵,可能是管路也可能是柱子。楼主每次做完实验冲洗的时间也太短了,各10分钟肯定不够的,很多杂质在柱子里还没出来就被你换成另外一种流动相了,长此以往柱子当然会堵。我以前也遇到过,机器给学生用了一学期,做完随便冲一下就等不及的要走,结果一开机压力就快到最大压力。建议先把柱子卸了,调高柱温箱温度,用纯水冲冲管路,也可以换另一边柱温箱用用,就是柱外体积有会差别不会有太多影响。如果是柱子建议用以下方法彻底冲洗:95水5甲醇冲洗1小时,换成100甲醇冲洗1小时,100乙腈1小时,100异丙醇1小时,100正己烷一小时,再按照这个反过来冲一遍,基本会好。如果是缓冲盐堵得太厉害就只有反冲了,那是死马当活马医,反冲后柱子寿命也就差不多了。
16楼2011-03-23 23:46:02
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花木兰2010

银虫 (初入文坛)


wjgsunny(金币+1,VIP+0):谢谢你的回复!我每次做完都用甲醇:水=80:20,然后用20:80,然后甲醇,各十分钟!
你用10%的甲醇和90%的水冲,不要单纯的用有机相。你试试,应该能行。
2楼2008-12-29 10:59:35
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kkroy

铜虫 (小有名气)


wjgsunny(金币+1,VIP+0):谢谢你的回复!
楼上正解,人家Agilent也说过50%IPA溶液是个好东东啊,你试试吧
3楼2008-12-29 11:11:38
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kkroy

铜虫 (小有名气)


wjgsunny(金币+1,VIP+0):谢谢你的建议,你反冲过柱子没,反冲冲洗流动相组成是怎么样的啊?我师兄说色谱柱反冲会使柱效降低!所以我想先了解清楚!
如果是不溶解在流动相的东西,你可以试着反冲,0.2~0.4ml/min,压力最好别超过40BAR,冲个1~2h左右,对了你有用保护柱嘛?
4楼2008-12-29 11:14:28
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