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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 无缝克隆
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小元元的哈哈

新虫 (初入文坛)

[求助] 无缝克隆

我验证启动子功能，载体双酶切后回收，跑胶检测正确。目的片段是连接在PM19T上的，测序正确后提了质粒，设计了同源重组的引物，从T载体上将我的启动子目的片段克隆了下来，跑胶回收。使用了天根的无缝克隆试剂盒，连接后涂板，菌落长的比较慢，16个小时后挑的单克隆，挑了8个，用我同源重组的引物检测，跑胶没有条带！！！已经重复了三次了。不知道是哪里出了问题。求各位大神相助！！！！！感激不尽！！！

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-03-22 15:26:54
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
抗性呢？

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4楼2017-03-23 23:22:39
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育种小飞

新虫 (初入文坛)
用载体的引物扩增一下试试

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2楼2017-03-22 19:06:17
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小元元的哈哈

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 育种小飞 at 2017-03-22 19:06:17
用载体的引物扩增一下试试

嗯，我也这么想，昨天刚设计了载体引物

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3楼2017-03-23 22:11:37
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
多做几个单克隆吧，假阳性多

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5楼2017-03-23 23:23:11
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