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小元元的哈哈

新虫 (初入文坛)

[求助] 无缝克隆

我验证启动子功能,载体双酶切后回收,跑胶检测正确。目的片段是连接在PM19T上的,测序正确后提了质粒,设计了同源重组的引物,从T载体上将我的启动子目的片段克隆了下来,跑胶回收。使用了天根的无缝克隆试剂盒,连接后涂板,菌落长的比较慢,16个小时后挑的单克隆,挑了8个,用我同源重组的引物检测,跑胶没有条带!!!已经重复了三次了。不知道是哪里出了问题。求各位大神相助!!!!!感激不尽!!!

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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育种小飞

新虫 (初入文坛)

2楼2017-03-22 19:06:17
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小元元的哈哈

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 育种小飞 at 2017-03-22 19:06:17
用载体的引物扩增一下试试

嗯,我也这么想,昨天刚设计了载体引物

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3楼2017-03-23 22:11:37
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

4楼2017-03-23 23:22:39
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

多做几个单克隆吧,假阳性多

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5楼2017-03-23 23:23:11
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水晶GIRL梦

新虫 (初入文坛)


silicare: 金币-1, 文明用语 2017-04-19 09:42:14
内容已删除
6楼2017-03-25 10:28:01
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