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急急急183

新虫 (初入文坛)

[求助] 高效液相色谱测定生物胺,找不出物质,求解答已有1人参与

我在做生物胺的检测,现在还在做标准品,完全没有头绪,一片混乱。
我用的是岛津的高液,具体步骤如下:
标准品色胺1.0mg/ml(0.1mol/l盐酸配置)、丹磺酰氯5mg/ml(丙酮配置)
1、衍生:取标准液1ml,加入200微升的2mol/l的氢氧化钠溶液,然后加入300微升饱和碳酸氢钠溶液缓冲,再加入1ml衍生剂丹磺酰氯,40摄氏度水浴45min(黑暗中进行),之后加入100微升氨水,黑暗中放置30min;最后用乙腈定容到5ml,过0.22微米有机滤膜后测定。
2、检测条件:HPLC(岛津)柱温30摄氏度,流速5微升/秒,流动相A为超纯水,B为乙腈(色谱级),梯度洗脱如下图。
现在就是各种杂峰,找不到原因,不知道是否测出来了。求帮忙

高效液相色谱测定生物胺,找不出物质,求解答


高效液相色谱测定生物胺,找不出物质,求解答-1


高效液相色谱测定生物胺,找不出物质,求解答-2


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shhsmx

新虫 (初入文坛)

前面的高峰是衍生化试剂,目标物质建议做几个浓度点同时做空白对照,峰面积成线性空白没有的可能就是你的目标峰

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7楼2017-03-22 21:20:49
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小尧少爷

新虫 (初入文坛)

因为你是标准品检测,找不到目标峰,同样的条件标准液进行换成空白(溶剂),衍生,检测。只是建议哈,生物胺我也没做过

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4楼2017-03-22 14:24:23
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
将蒸馏水当做空白执行衍生等步骤,找出基质,然后在确定目标
6楼2017-03-22 15:09:55
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rex-yu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小尧少爷 at 2017-03-22 14:24:23
因为你是标准品检测,找不到目标峰,同样的条件标准液进行换成空白(溶剂),衍生,检测。只是建议哈,生物胺我也没做过

您好
我这边也是想做液相色谱,
是A/B两种醇胺溶液,然后混合之后吸收CO2,致使混合溶液分上、下两相,但不确定上下相到底是含A/还是B。

是想这么做:A/B作为空白溶剂,然后分别取上下两相,从出峰情况确定含量。
不过需不需要确定A/B的的出峰时间啊?这个从文献中也没有找到,您看可以这么做么
智商不够,智力不足,还不用心,尽管挺会立志(励志),呵呵/
8楼2017-03-24 17:35:02
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小尧少爷

新虫 (初入文坛)

2楼2017-03-22 13:27:18
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急急急183

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小尧少爷 at 2017-03-22 13:27:18
做个空白对照

什么空白?

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3楼2017-03-22 13:55:39
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急急急183

新虫 (初入文坛)

5楼2017-03-22 14:32:03
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rex-yu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by shhsmx at 2017-03-22 21:20:49
前面的高峰是衍生化试剂,目标物质建议做几个浓度点同时做空白对照,峰面积成线性空白没有的可能就是你的目标峰

不需要确定目标峰的出峰时间么
智商不够,智力不足,还不用心,尽管挺会立志(励志),呵呵/
9楼2017-03-24 17:37:05
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小太阳lu

新虫 (初入文坛)

怎么不用衍生化测定呢?

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10楼2017-03-28 11:15:20
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