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122888

新虫 (正式写手)

[求助] 求教蛋白包涵体表达

各位大神,预测我的蛋白在包涵体中表达,可是如图所示,超声破碎离心之后,包涵体的量特别少,而且颜色是橙色的,这个要怎么解决啊,拜托啦!

求教蛋白包涵体表达


求教蛋白包涵体表达-1


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tams137

铁虫 (小有名气)


2楼2017-03-21 17:33:57
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122888

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tams137 at 2017-03-21 17:33:57
优化一下培养基吧。

优化培养基?麻烦能说的详细一点吗?谢谢

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3楼2017-03-21 18:21:38
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122888

新虫 (正式写手)

大家都给提点意见啊!帮帮忙

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4楼2017-03-21 21:26:55
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muchong5577

金虫 (正式写手)

更换表达宿主菌或者低温诱导表达。
5楼2017-03-22 13:53:35
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liudongxijun

铜虫 (小有名气)

黄色 应该是培养基残留的颜色,一般我们都是避免包涵体产生的,所以需要低温诱导,至于你说的量少,没看到你的具体数据,所以不能给你建议。我只做过大肠杆菌发酵,所以给你的意见是,前期LB培养基菌体时,确定是否表达就可以了,在收集菌体时,用0.1 PBS洗3次,然后再超声破碎,离心,这样颜色就不会那么黄了,至于检测方法,看你自己的了。菌种的选择很关键,如果你倾向机理研究,那就选个高级的宿主菌,如果你想做放大生产,就选个普通的宿主菌。
6楼2017-03-22 14:53:25
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