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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 紧急求救：PCR-电泳
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wyong186

木虫 (正式写手)

[交流] 紧急求救：PCR-电泳

真心请教各位分子生物技术高手两个问题：（1）PCR产物进行电泳检测时，30min后为什么还总在加样孔中不动呢？（2)PCR阴性对照出现涂抹带，所有的试剂，枪头都重新换过了，怎么还是这样呢？

前几次做的都挺好，分子实验怎么也这么多变啊？




谢谢各位虫子的帮助，我已经找到真正的原因了，谢谢各位！

[ Last edited by wyong186 on 2009-1-5 at 12:16 ]
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1楼 2008-12-26 17:40:50
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pph0259

木虫 (正式写手)
★
wyong186(金币+1):谢谢参与
这基本上是不可能的事情，加了样，不插电源，还会出现DNA弥散现象，怎么会还呆在加样孔呢？
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2楼2008-12-26 18:19:44
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
★
wyong186(金币+1):谢谢参与
没遇到过这种问题
电泳液有没有问题啊
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3楼2008-12-26 18:40:49
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wyong186

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by pph0259 at 2008-12-26 18:19:
这基本上是不可能的事情，加了样，不插电源，还会出现DNA弥散现象，怎么会还呆在加样孔呢？

有一点弥散，但大部分都好像在加样孔。疯掉了，找不到原因
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4楼2008-12-26 19:25:34
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
wyong186(金币+1):谢谢参与
(1)marker怎么样,
(2)阴性对照出现smear并不能说明被污染了吧(如果污染应该是出现特异的条带)
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5楼2008-12-26 19:41:48
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wyong186

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2008-12-26 19:41:
(1)marker怎么样,
(2)阴性对照出现smear并不能说明被污染了吧(如果污染应该是出现特异的条带)

谢谢，MARKER跑的很好。
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6楼2008-12-26 20:06:51
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sealeier

★
wyong186(金币+1):谢谢参与
是不是没p出来啊，加样孔的东西可能是蛋白什么的
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7楼2008-12-26 20:15:32
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chchy2085

木虫 (正式写手)
★
wyong186(金币+1):谢谢参与
如果体系没有问题的话，可能是你的缓冲液或者电泳设备出问题了吧
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8楼2008-12-26 21:11:27
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
wyong186(金币+1):谢谢参与
我同意7楼看法，有可能根本就没P出来，留在点样空中的东西可能是蛋白等一类东西，这些东西也会被EB染色后显色。
阴性对照出现要注意操作的细节，是否在操作过程中手碰到PCR管的盖子或管口。按要求来说PCR反映体系应该是在超净工作台里配制的，但是我经常见到有人不在超净台内配制，这样的话如果你们实验室长期做某种菌的试验空气中的含量就有可能污染。气溶胶的问题在做 Real Time 的时候一定要考虑在内。解决办法就是换一个环境做。
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9楼2008-12-26 22:59:04
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csx2044

至尊木虫 (正式写手)
★
wyong186(金币+1):谢谢参与
重新换电泳槽，更换电泳液，我觉得十有八九就是电泳装置的问题。
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我为虫虫，虫虫为我
10楼2008-12-27 00:02:10
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