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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 紧急求救：PCR-电泳
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gr0613

铁虫 (初入文坛)
★ ★
wyong186(金币+1):谢谢参与
wyong186(金币+1,VIP+0):谢谢
可能原因：
一：加样孔有蛋白，但是不影响电泳
二：胶的问题。假如胶不平，会出现这种现象。我今天就遇到一次，孔附近的高度低，导致跑不出去。
三：换TAE，TAE时间过久
四：电泳仪的问题。
逐个排查，应该没有问题的
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11楼2008-12-27 01:50:27
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suguang

铜虫 (初入文坛)
★
wyong186(金币+1):谢谢参与
1、可能是接触不良或者电泳设备有问题了；
2、可以适量提高退火温度，减少非特异扩增；另外看是不是模板的问题，是不是加太多了；引物是否设计合理这都是要考虑的问题
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12楼2008-12-27 13:51:58
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
★
wyong186(金币+1):谢谢参与
对照能出现条带，说明不大可能是电泳装置的问题。
建议在看一下PCR过程，可能就是没有P出来，或者在marker之外再加一组对照，基因组或者其他PCR产物都可以，那样可能更能说明问题。
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13楼2008-12-27 17:42:02
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
之前我还遇到过一次是，做完胶后，忘记把封胶的透明胶撕下来就直接点样电泳了，所以很多都在孔里面才跑不出去。跑了半小时看结果才发现问题。跑电泳时候注意一下，电压和电流的情况，以及电泳槽两头气泡的问题。
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14楼2008-12-27 17:48:34
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j2

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
wyong186(金币+1):谢谢参与
wyong186(金币+3,VIP+0):谢谢
有蛋白的话也是蛋白留在孔里，产物该跑出来啊，除非全是蛋白，要不就胶浓度太大了，孔小了跑不出来。
电泳液最好是新鲜的，用久了应该产热很厉害啊，看的出来吧。
marker跑的好不该是电泳本身出了多大问题啊。奇怪？？？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
15楼2008-12-28 10:11:20
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bone0611

★
wyong186(金币+1):谢谢参与
没p出来吧。去做个核酸定量看看。看一下260／280的值是否异常
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16楼2008-12-28 21:46:41
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★ ★
wyong186(金币+1):谢谢参与
wyong186(金币+2,VIP+0):谢谢
每次电泳之前，换新的缓冲液
检查电源连接是否有问题
有可能是多糖，酚类或者是蛋白，这说明你的模板不是很纯，杂质太多，即便是pcr有产物，点样孔也会是这样的
你的阴性对照和上述是一样的原因
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会当凌绝顶，一览众山小
17楼2008-12-28 23:40:51
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hulqi

金虫 (正式写手)
★
wyong186(金币+1):谢谢参与
我觉得不是电泳仪的问题，因为marker跑的正常嘛。有可能是没P出来，可能性很大。电泳的原理是DNA分子负电性，如果没跑出来，那就是肯定是点样孔中不是负电性的基团……
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18楼2008-12-29 00:56:01
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