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[交流]
紧急求救细菌与电泳的问题
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各位同仁，十万火急，望知道的不吝赐教 我做的是电泳测定细菌中的蛋白质，先是把细菌高速离心，去上清，然后加入2*上样缓冲溶液，关键是这个上样缓冲溶液怎么加，加多少，因为是固体，不是液体。然后煮沸冷却做电泳。但是我做了几次，都是没有带，点样的时候基本上都是固体，基本不跑，即使跑也是很慢，很不正规。我知道是应该取上清液点样，但是基本没有上清液啊。各位有这种情况的或知道的请不吝赐教。 谢谢先 |
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2楼2008-12-26 21:11:49
chinosaur
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2*上样缓冲液加多少其实没什么关系，我一般加20-40微升，菌少就20，多一点就40，建议你加40微升吧，加完之后盖好用VORTEX振荡，然后用小离心机把壁上的液体离下来，然后99度（我们用的干式恒温器，100度会暴沸）煮5分钟，然后用离心机12000转离一分钟，就可以加样了,加5微升或10微升，如果胶孔大可以加多一点，加的时候注意不要吸到底部的渣滓。如果你觉得不保险还可以再振荡一下，煮5分钟，然后高速离心，就是重复一次。我平时就是这么做的，百试不爽。 不过我做的蛋白是诱导表达的，产量一般会很高，如果你的不是，可以选择少加点上样缓冲液，加样的时候多加一点。 [ Last edited by chinosaur on 2008-12-27 at 11:22 ] |
3楼2008-12-27 11:07:03