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lauren180

木虫 (著名写手)

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[资源] 如何阅读质粒图谱

如何阅读质粒图谱
第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
（1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活
（5）hygr 使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于
外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标
志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的
基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外
源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转
化效率越低。
第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位
点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入
一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要
以实验目的为准绳。
启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号
a 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子
编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转
录的部位，但启动子本身不被转录。
b增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有
增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向
无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，
负调控序列。
c核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体
d 转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显
子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰
区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中
有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，
这2部分共同构成poly（A）加尾信号。
回答有人之前提出的一个问题：为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的
箭头逆时针，那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的
启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上.
http://space.biox.cn/3776/viewspace-63356.html

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