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蛋白纯化 已有3人参与
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蛋白纯化过程中，每次测浓度，最大吸收都在260.可SDS胶上有明显目的条带，而且随纯化步骤进行，目的蛋白不见了，这是为什么呢，求大神指点？ 发自小木虫Android客户端 |
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medi812
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1.是不是聚沉了 纯化过程导致蛋白aggregate很正常 看看是不是在哪个柱子上aggregate太多 都卡在柱子上了 最后变成杂质被洗出去了 2.要是离子交换之后找不到条带了，拉开梯度，多收点fraction 再用sds看看能不能找到 要是能找到就说明离子交换的方法有问题 3.柱子是不是太老，不行就需要重生或者换柱子 4.我一般最经常看到recovery降低是在SEC上面 我还没想清楚怎么回事 不过要是最后做polish的时候确实可能会损失一部分 |
2楼2017-03-27 04:20:32
furongzhen
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furongzhen
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理论上每步纯化都会有蛋白损失，还有考虑你的蛋白是否不稳定；建议优化纯化方法，或考虑蛋白本身性质 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-03-28 01:49:51
