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赵晴儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 克基因片段退火怎么55度若克不出来,其他温度是不是也克不出来... 已有7人参与

克基因片段退火怎么55度若克不出来,其他温度是不是也克不出来?

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wqq4706

新虫 (初入文坛)

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★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:48:26
你这种说法绝对是不对的,其实每对引物都有他们自己合适的退火温度,我也做过49度的,也有59度的,55度不行,就先看看理论Tm值是多少,一般在它的基础上减5,要是还不行,就试试全梯度45-60度,要不行就换个公司DNA聚合酶试试
6楼2017-03-15 19:26:50
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坤啊兽

铁虫 (初入文坛)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:47:40
模板的量做梯度试试,退火温度还可以降到52~54度试试
3楼2017-03-15 15:46:10
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引物的Tm值是多少?
4楼2017-03-15 15:49:25
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小冀-

版主 (著名写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:48:02
不一定,P不出来和引物,模板,温度都有关系,优化一下
···
5楼2017-03-15 19:16:45
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冰之雪域

新虫 (小有名气)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:48:54
这个说法肯定不对,PCR受多方面因素的影响。首先可以尝试温度梯度,50-60度。如果不是退火的原因,那就检查下你的基因片段是不是高GC含量的,如果是的话,你可以选择扩增高GC含量的酶和相应的buffer 。

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7楼2017-03-15 22:04:04
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普通回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

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做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。
2楼2017-03-15 11:00:04
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无知的小强

木虫 (正式写手)

先复习下pcr的原理吧,看看有哪些因素会影响

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Behind the mask is an idea, and ideas are bulletproof.
8楼2017-03-16 09:10:15
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sodagreen6

新虫 (初入文坛)

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可能是设计引物的时候两条引物的Tm差异太大了
9楼2017-03-16 09:42:00
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李保磊

金虫 (著名写手)

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为什么退火温度一定是55℃,这个需要计算啊,有一定幅度,你可以多试几次,温度梯度;此外,扩不出来,也不一定是退火温度,也可能是镁离子浓度,模板,酶等的问题

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做最棒的自己!!
10楼2017-03-16 12:29:59
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