24小时热门版块排行榜    

查看: 1371  |  回复: 10

赵晴儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 克基因片段退火怎么55度若克不出来,其他温度是不是也克不出来... 已有7人参与

克基因片段退火怎么55度若克不出来,其他温度是不是也克不出来?

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wqq4706

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:48:26
你这种说法绝对是不对的,其实每对引物都有他们自己合适的退火温度,我也做过49度的,也有59度的,55度不行,就先看看理论Tm值是多少,一般在它的基础上减5,要是还不行,就试试全梯度45-60度,要不行就换个公司DNA聚合酶试试
6楼2017-03-15 19:26:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

坤啊兽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:47:40
模板的量做梯度试试,退火温度还可以降到52~54度试试
3楼2017-03-15 15:46:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引物的Tm值是多少?
4楼2017-03-15 15:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:48:02
不一定,P不出来和引物,模板,温度都有关系,优化一下
···
5楼2017-03-15 19:16:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰之雪域

新虫 (小有名气)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:48:54
这个说法肯定不对,PCR受多方面因素的影响。首先可以尝试温度梯度,50-60度。如果不是退火的原因,那就检查下你的基因片段是不是高GC含量的,如果是的话,你可以选择扩增高GC含量的酶和相应的buffer 。

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-03-15 22:04:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。做梯度。
2楼2017-03-15 11:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无知的小强

木虫 (正式写手)

先复习下pcr的原理吧,看看有哪些因素会影响

发自小木虫Android客户端
Behind the mask is an idea, and ideas are bulletproof.
8楼2017-03-16 09:10:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sodagreen6

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是设计引物的时候两条引物的Tm差异太大了
9楼2017-03-16 09:42:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李保磊

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么退火温度一定是55℃,这个需要计算啊,有一定幅度,你可以多试几次,温度梯度;此外,扩不出来,也不一定是退火温度,也可能是镁离子浓度,模板,酶等的问题

发自小木虫Android客户端
做最棒的自己!!
10楼2017-03-16 12:29:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 赵晴儿 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +11 YXCT 2026-03-01 13/650 2026-03-02 21:38 by sunny81
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +5 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 9/450 2026-03-02 21:33 by sunny81
[考研] 295求调剂。一志愿报考郑州大学化学工艺学硕,总分295分 +8 yl1 2026-03-02 9/450 2026-03-02 21:21 by sunny81
[考研] 理学,工学,农学调剂,少走弯路,这里欢迎您! +5 likeihood 2026-03-02 8/400 2026-03-02 20:39 by ji493940045
[考研] 0856材料调剂 +5 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:31 by hypershenger
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +9 吃宵夜1 2026-02-28 11/550 2026-03-02 20:14 by hypershenger
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-02 3/150 2026-03-02 19:59 by hypershenger
[考研] 0805总分292,求调剂 +10 幻想之殇 2026-03-01 10/500 2026-03-02 19:51 by zhukairuo
[考研] 化工270求调剂 +9 什么名字qwq 2026-03-02 9/450 2026-03-02 19:31 by caszguilin
[考研] 化工京区271求调剂 +6 11ing 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:52 by caszguilin
[考研] 284求调剂 +5 天下熯 2026-03-02 5/250 2026-03-02 18:38 by caszguilin
[考研] 一志愿东北大学化学314分求调剂 +3 lr1212.. 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:36 by yeahyou
[考研] 清华大学 材料与化工 353分求调剂 +4 awaystay 2026-03-02 5/250 2026-03-02 17:33 by yeahyou
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +4 hit_aiot 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:53 by 一声问好
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +6 kyf化工 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:56 by 无际的草原
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见