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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 原核表达超声破碎的问题
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孙妙妙

金虫 (小有名气)

[交流] 原核表达超声破碎的问题

最近遇到一个很奇怪的问题，以前超声破碎时,若是包涵体,超声一般都不会得到澄清的溶液,而只有可溶的蛋白才可以把菌超到澄清状态.可这次怎么超了一会也澄清了,但20分钟11000rmp离心分上清沉淀后,sds-page发现蛋白居然完全不可溶,全在沉淀里.换了Buffer，和超声破碎仪都还是这种情况，请问各位虫友有遇到过吗？
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1楼 2017-03-14 22:05:53
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
★
孙妙妙(金币+1): 谢谢参与
跟你超声的菌量有关吧，菌液稀，超声出来的就比较澄清。
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2楼2017-03-14 23:21:23
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孙妙妙

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-14 23:21:23
跟你超声的菌量有关吧，菌液稀，超声出来的就比较澄清。

菌的量和平时差不多啊，是正常的。
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3楼2017-03-14 23:26:26
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siyuyouai

银虫 (小有名气)
★
孙妙妙(金币+1): 谢谢参与
超生声澄清不一定就是可溶，有时候蛋白会形成一些小的包涵体，虽然不至于混浊，但是不是单体
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4楼2017-03-16 09:23:55
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法式小面包

铜虫 (小有名气)
★
孙妙妙(金币+1): 谢谢参与
我也遇到过，表达条件没有控制好吧。我后来降低了温度就可溶了。
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5楼2017-03-29 16:59:42
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炀炀呦

新虫 (初入文坛)
★
孙妙妙(金币+1): 谢谢参与
我也做了超声波的，也有小颗粒生成，感觉是蛋白变形了

发自小木虫Android客户端
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6楼2017-03-29 17:05:46
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HHHH0099

银虫 (小有名气)
★
孙妙妙(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by 法式小面包 at 2017-03-29 16:59:42
我也遇到过，表达条件没有控制好吧。我后来降低了温度就可溶了。

请问一下，我现在是16度包涵，能再降温么？最低还能到多少？
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7楼2017-09-01 10:02:44
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少年。

新虫 (初入文坛)
★
孙妙妙(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
7楼: Originally posted by HHHH0099 at 2017-09-01 03:02:44
请问一下，我现在是16度包涵，能再降温么？最低还能到多少？...

可以试着变换一下其他条件，比如‘摇菌的时间，IPTG的浓度，诱导的时间，温度也可以设置一下梯度，不一定16℃就是最适合你那个蛋白的’
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8楼2017-09-01 10:36:07
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