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Zhenhui_Ren

新虫 (初入文坛)

[求助] 老师,你好~我刚开始做实验,实验方法是crispr/cas9...

老师,你好~我刚开始做实验,实验方法是crispr/cas9但是我对分子生物学的相关技术都不太懂,最近看了一些文献知道这个方法的大致步骤了,但是现在不知道从哪儿着手开始,也不知道该准备什么实验用品,希望老师能给我一些指点

@biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw @wizardfan 发自小木虫IOS客户端
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leeking1113

新虫 (初入文坛)

2楼2017-03-15 23:54:44
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前行的璐

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by leeking1113 at 2017-03-15 23:54:44
最重要是选好载体

您好,我想问下gRNA表达载体怎么选择?要考虑的因素有哪些?
3楼2017-03-19 11:05:10
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1487298091

新虫 (初入文坛)

根据物种选择合适的表达载体,哺乳动物,有很多选择-----材料:载体   ()植物,细菌等载体不同)
设计gRNA靶点,在线网站或本地软件-------材料:软件
构建载体,(cas9 gRNA共表达或分开表达载体均可)-----载体酶切链接需要的试剂
转染细胞,筛选-------材料:转染试剂或电转,抗性筛选或流式
DNA提取,PCR-------材料:DNA提取试剂盒,PCR引物等
打靶效率检测-----材料:T7E1酶,测序
大概就这些,如果还有疑问,可加我Q,左侧名称即是号码,全套设计及材料
4楼2017-03-23 12:41:11
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Zhenhui_Ren

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 1487298091 at 2017-03-23 12:41:11
根据物种选择合适的表达载体,哺乳动物,有很多选择-----材料:载体   ()植物,细菌等载体不同)
设计gRNA靶点,在线网站或本地软件-------材料:软件
构建载体,(cas9 gRNA共表达或分开表达载体均可)-----载体 ...

十分感谢!~

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5楼2017-03-25 16:55:02
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