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Zhenhui_Ren

新虫 (初入文坛)

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专业: 基础兽医学

[求助] 老师，你好～我刚开始做实验，实验方法是crispr/cas9...

老师，你好～我刚开始做实验，实验方法是crispr/cas9但是我对分子生物学的相关技术都不太懂，最近看了一些文献知道这个方法的大致步骤了，但是现在不知道从哪儿着手开始，也不知道该准备什么实验用品，希望老师能给我一些指点

@biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw @wizardfan 发自小木虫IOS客户端

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1楼 2017-03-14 21:36:03

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leeking1113

新虫 (初入文坛)

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专业: 中药资源

最重要是选好载体

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2楼2017-03-15 23:54:44

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前行的璐

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by leeking1113 at 2017-03-15 23:54:44
最重要是选好载体

您好，我想问下gRNA表达载体怎么选择？要考虑的因素有哪些？

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3楼2017-03-19 11:05:10

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1487298091

新虫 (初入文坛)

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虫号: 6114257
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专业: 生物化学

根据物种选择合适的表达载体，哺乳动物，有很多选择-----材料：载体（）植物，细菌等载体不同）
设计gRNA靶点，在线网站或本地软件-------材料：软件
构建载体，(cas9 gRNA共表达或分开表达载体均可）-----载体酶切链接需要的试剂
转染细胞，筛选-------材料：转染试剂或电转，抗性筛选或流式
DNA提取，PCR-------材料：DNA提取试剂盒，PCR引物等
打靶效率检测-----材料：T7E1酶，测序
大概就这些，如果还有疑问，可加我Q，左侧名称即是号码，全套设计及材料

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4楼2017-03-23 12:41:11

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Zhenhui_Ren

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 1487298091 at 2017-03-23 12:41:11
根据物种选择合适的表达载体，哺乳动物，有很多选择-----材料：载体（）植物，细菌等载体不同）
设计gRNA靶点，在线网站或本地软件-------材料：软件
构建载体，(cas9 gRNA共表达或分开表达载体均可）-----载体 ...

十分感谢！～

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5楼2017-03-25 16:55:02

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