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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 大神，用胶回收试剂盒进行胶回收，浓度特别低，怎么回事儿呀？
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18347265620

新虫 (初入文坛)

[求助] 大神，用胶回收试剂盒进行胶回收，浓度特别低，怎么回事儿呀？ 已有2人参与

大神，用胶回收试剂盒进行胶回收，浓度特别低，怎么回事儿呀？

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1楼 2017-03-14 09:17:35
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Carson同学

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:46:13
胶做的厚点，争取将胶孔加满，切胶的时候把没用的部分尽量切掉不要保留。
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2楼2017-03-14 09:28:01
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bbass533

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:46:47
本帖内容被屏蔽
3楼2017-03-14 09:36:27
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王秀秀要努力

新虫 (初入文坛)
是不是你样本来浓度浓度就低

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4楼2017-03-14 09:44:51
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Ivancao0908

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2017-03-14 13:06:48
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飞翔的吉大人

新虫 (初入文坛)
你跑完胶以后的浓度好不好，如果不好，再回收也是不高，先抛去操作过程中是否出现了其他问题

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6楼2017-03-14 14:00:26
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18347265620

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bbass533 at 2017-03-14 09:36:27
你PCR后条带亮么？胶回收效率本来就低的，建议你制0.8%的胶，切胶时尽量切小点；还有就是上柱的时候等溶液凉到室温；洗脱之前TE热一下。也就这点招了，实在不行你就多扩增几管，洗脱时体积小点浓缩下。

条带挺亮的，我再试试吧，谢谢

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7楼2017-03-14 15:10:52
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森林里的八嘎

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-03-17 07:47:24
正常胶回收的kit 效率在60%++吧
可以注意一下最后一步溶解时候50℃孵育2min

另 以下计算 请
加了多少样品电泳   假设是5u
那么按照60% 剩3u 回收总量就是3u*浓度a
但是你TE加了一般30u~50u
这样就相当于稀释了10倍 浓度自然低

建议：制备型电泳 100u样品点样 切大胶条回收
另还有个土办法 直接拿手挤切下的胶条 吸挤出来的溶液 那个就是核酸片段了……
屡试不爽 随挤随用
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8楼2017-03-17 01:26:28
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M-小妮儿

铁虫 (初入文坛)
胶回收后260/280只有1.4-1.5  260/230也＜1，没有吸收峰，是怎么回事，浓度也特别低，重复三遍了。请问是什么问题？

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9楼2017-04-04 17:38:15
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夕阳安好

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 森林里的八嘎 at 2017-03-17 01:26:28
正常胶回收的kit 效率在60%++吧
可以注意一下最后一步溶解时候50℃孵育2min

另 以下计算 请
加了多少样品电泳   假设是5u
那么按照60% 剩3u 回收总量就是3u*浓度a
但是你TE加了一般30u~50u
这样就相当于稀释 ...

你确定可以挤吗？一挤不就碎了吗？
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10楼2018-10-30 20:22:47
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