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w789xd

新虫 (初入文坛)

[求助] red同源重组PCP20质粒转化问题 已有2人参与

最近在做red重组,已经用氯霉素抗性基因替换了敲除基因,用PCP20质粒做电转,37度培养1h,划氨苄平板30度,取单菌落转接划到另一个氨苄平板30度,然后取单菌落接LB培养基42度培养,在无抗平板上划单菌落,取单菌落影印到氯霉素,氨苄霉素,无抗平板上,但结果所有的平板都长了菌,求各位大神帮忙找找原因,谢谢,很急!!

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w789xd

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2017-03-13 12:21:19
验证一下感受态细胞吧,看看是不是感受态染菌了

谢谢您的回复,我做了三批感受态做了四次都是这样的结果,染了杂菌都有氨苄抗性和氯霉抗性的可能性也不是很高。

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3楼2017-03-13 20:19:53
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
验证一下感受态细胞吧,看看是不是感受态染菌了
···
2楼2017-03-13 12:21:19
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by w789xd at 2017-03-13 20:19:53
谢谢您的回复,我做了三批感受态做了四次都是这样的结果,染了杂菌都有氨苄抗性和氯霉抗性的可能性也不是很高。
...

好吧,你确认一下抗生素有没有失效,如果没有的话还真不知道是哪里的问题

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

···
4楼2017-03-13 20:57:11
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碾压

新虫 (初入文坛)

楼主我也遇到过同样的问题,后来发现确实是感受态的问题,建议楼主确认一次重组菌是否还是你的那个菌

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2017-03-14 11:18:36
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