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red同源重组PCP20质粒转化问题 已有2人参与
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最近在做red重组，已经用氯霉素抗性基因替换了敲除基因，用PCP20质粒做电转，37度培养1h，划氨苄平板30度，取单菌落转接划到另一个氨苄平板30度，然后取单菌落接LB培养基42度培养，在无抗平板上划单菌落，取单菌落影印到氯霉素，氨苄霉素，无抗平板上，但结果所有的平板都长了菌，求各位大神帮忙找找原因，谢谢，很急！！ 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2017-03-13 12:21:19
3楼2017-03-13 20:19:53
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w789xd4楼2017-03-13 20:57:11
5楼2017-03-14 11:18:36
6楼2017-03-14 12:19:08
7楼2017-03-14 12:19:33
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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我之前和你的情况一样，在两种抗性平板上都长，并且我拉了pcr进行验证，始终都得不到我要的条带，后来我把做感受态的一次重组菌验证了一下，发现并不是我原本的菌，建议你确定每一步都没问题后再往下做，不然浪费很长时间 发自小木虫IOS客户端 |
8楼2017-03-14 14:16:54
9楼2017-09-12 09:42:08