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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇==
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Sunshine_WHL

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇== 已有1人参与

我做成骨方向，是裂解C2C12细胞，然后用Western Blot分析细胞内pSmad1/5/8蛋白的含量。我计算了一下我跑胶的上样量大约45ug，然后按我们实验室前辈们摸索出来的经验，恒电压80V至跑出条带，然后换100V跑，整个过程大约90min。pSmad分子量大约在60kDa,我用的内参GAPDH在36kDa，于是转膜我用300mA转70min，感觉转的挺好的。接下来我用5%BSA室温封闭3h，然后加入1:1000的一抗4度孵育过夜，第二天吸出一抗用TBST洗三遍，每次5min，然后加入1：1000二抗室温孵育2h，然后用TBST洗三遍，每次5min，接下来就用ECL显色剂显色了，可是我跑了好几次感觉都不一样。。。
附件1是我上次跑的pSmad有一条，附件2是我这次跑的居然有3条。。。要哭了，有谁可以解释一下吗？

求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇==
1.PNG


求助Western大神，我的pSmad怎么跑出来是三条呢？？？蓝瘦香菇==-1
2.PNG
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1楼 2017-03-12 13:45:22
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安徽锐达微波


发自小木虫Android客户端
2楼2017-03-12 14:05:19
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匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-13 07:47:01
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3楼2017-03-13 00:04:33
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