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annwt

木虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
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红花: 5
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在线: 257.3小时
虫号: 400594
注册: 2007-06-12
性别: GG
专业: 生物物理、生物化学与分子

[交流] 有提土壤DNA的好方法吗？

近来提土壤DNA屡遭失败，不知谁有好方法，介绍介绍，先感谢参与的大家了！！！

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烦躁已经有5人回复
寻找合作团队已经有4人回复

1楼 2008-12-25 07:35:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

蓝色基因

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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散金: 8
帖子: 345
在线: 26.3小时
虫号: 681070
注册: 2008-12-24
专业: 环境微生物学

周集中的方法，正好我硕士论文里面有：

① 15d细菌培养物，取固液混合样10ml用0.22μm微孔滤膜过滤，滤余物与3 g干热灭菌的沙子一起倒入研钵，加入液氮反复研磨；
② 将研磨后的样品与沙子混合物转移至50 mL离心管中，加DNA抽提缓冲液13.5 mL，加入50 μL蛋白酶K，37℃水浴30 min；
③ 加1.5 mL SDS并轻轻摇动混匀。65℃水浴2个小时，期间每隔15～30分钟摇动一次；
④ 4000 r/min离心5 min。转移上清液到一个新的离心管中；
⑤ 往管底沉淀再加4.5 mL缓冲液和0.5 mL SDS，混匀,65℃水浴15 min。4000 r/min离心5 min。收集上清液倒入先前的离心管；
⑥ 重复步骤○5一次；
⑦ 在装有上清液的离心管中倒入等体积的氯仿。3900 r/min离心20 min；
⑧ 重复步骤○7一次；
⑨ 收集上清液，加入0.6倍体积的2-异丙醇。室温静置1h或静置过夜。
⑩ 将静置或过夜样品11000 r/min离心45 min，倒掉上清液，加入5 mL 70%乙醇，用枪头轻轻吸打均匀；
⑪ 4000 r/min离心15 min，倒掉上清液。加入200～500 μL单蒸水后于65℃水浴一段时间溶解；
⑫ 对DNA初提产物进行纯化后，转移至EP管中于－20ºC保存。