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annwt

木虫 (正式写手)

[交流] 有提土壤DNA的好方法吗?

近来提土壤DNA屡遭失败,不知谁有好方法,介绍介绍,先感谢参与的大家了!!!
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

去查周集中的方法去 
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2008-12-25 11:39:43
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pzhan1982

金虫 (著名写手)

无外乎有蛋白质、酚、RNA的污染。
一步步的提纯!
要是有钱的话,可以买试剂盒提!
2楼2008-12-25 09:49:47
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gaofeicas

新虫 (初入文坛)

试剂盒吧,不过挺贵的
5楼2008-12-25 14:18:40
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蓝色基因

金虫 (正式写手)

周集中的方法,正好我硕士论文里面有:

①        15d细菌培养物,取固液混合样10ml用0.22μm微孔滤膜过滤,滤余物与3 g干热灭菌的沙子一起倒入研钵,加入液氮反复研磨;
②        将研磨后的样品与沙子混合物转移至50 mL离心管中,加DNA抽提缓冲液13.5 mL,加入50 μL蛋白酶K,37℃水浴30 min;
③        加1.5 mL SDS并轻轻摇动混匀。65℃水浴2个小时,期间每隔15~30分钟摇动一次;
④        4000 r/min离心5 min。转移上清液到一个新的离心管中;
⑤        往管底沉淀再加4.5 mL缓冲液和0.5 mL SDS,混匀,65℃水浴15 min。4000 r/min离心5 min。收集上清液倒入先前的离心管;
⑥        重复步骤○5一次;
⑦        在装有上清液的离心管中倒入等体积的氯仿。3900 r/min离心20 min;
⑧        重复步骤○7一次;
⑨        收集上清液,加入0.6倍体积的2-异丙醇。室温静置1h或静置过夜。
⑩        将静置或过夜样品11000 r/min离心45 min,倒掉上清液,加入5 mL 70%乙醇,用枪头轻轻吸打均匀;
⑪        4000 r/min离心15 min,倒掉上清液。加入200~500 μL单蒸水后于65℃水浴一段时间溶解;
⑫        对DNA初提产物进行纯化后,转移至EP管中于-20ºC保存。
6楼2008-12-27 11:08:40
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