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annwt木虫 (正式写手)
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有提土壤DNA的好方法吗？
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| 近来提土壤DNA屡遭失败，不知谁有好方法，介绍介绍，先感谢参与的大家了！！！ |
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brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
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4楼2008-12-25 11:39:43
pzhan1982
金虫 (著名写手)
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- 专业: 林产化学
2楼2008-12-25 09:49:47
5楼2008-12-25 14:18:40
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周集中的方法，正好我硕士论文里面有： ① 15d细菌培养物，取固液混合样10ml用0.22μm微孔滤膜过滤，滤余物与3 g干热灭菌的沙子一起倒入研钵，加入液氮反复研磨； ② 将研磨后的样品与沙子混合物转移至50 mL离心管中，加DNA抽提缓冲液13.5 mL，加入50 μL蛋白酶K，37℃水浴30 min； ③ 加1.5 mL SDS并轻轻摇动混匀。65℃水浴2个小时，期间每隔15～30分钟摇动一次； ④ 4000 r/min离心5 min。转移上清液到一个新的离心管中； ⑤ 往管底沉淀再加4.5 mL缓冲液和0.5 mL SDS，混匀,65℃水浴15 min。4000 r/min离心5 min。收集上清液倒入先前的离心管； ⑥ 重复步骤○5一次； ⑦ 在装有上清液的离心管中倒入等体积的氯仿。3900 r/min离心20 min； ⑧ 重复步骤○7一次； ⑨ 收集上清液，加入0.6倍体积的2-异丙醇。室温静置1h或静置过夜。 ⑩ 将静置或过夜样品11000 r/min离心45 min，倒掉上清液，加入5 mL 70%乙醇，用枪头轻轻吸打均匀； ⑪ 4000 r/min离心15 min，倒掉上清液。加入200～500 μL单蒸水后于65℃水浴一段时间溶解； ⑫ 对DNA初提产物进行纯化后，转移至EP管中于－20ºC保存。 |
6楼2008-12-27 11:08:40
