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会思考的大鹅

新虫 (初入文坛)

[求助] 用磷酸盐做流动相经常堵塞单向阀,要怎么选择代替的流动相? 已有2人参与

我的流动相是A 磷酸二氢铵(pH7.4):甲醇=95:5

                     B 甲醇:磷酸二氢铵(pH7.4)=95:5

先5%B2min,接着梯度升至60%B到20min,保持60%B15min,整个过程35min。流速为1ml/min。

每次都是头一天跑完没有问题,但是柱压很高达到2500psi,然后第二天在用同样的方法跑,就会堵塞单向阀,用的是waters e2695,出故障的时候显示lost prime,应该就是单向阀堵了。

是不是因为我用的是磷酸盐,所以它结晶了堵了,还是因为单向阀确实太脏了,因为之前也堵了好几次。

如果是我的流动相的问题,我换成A磷酸二氢铵(pH 7.4)B甲醇,不将它们混合做流动相,会有所改善吗?

还是我直接换成其他流动相,既然磷酸盐爱结晶,我可以替换成什么流动相才是比较合适的?
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chuanqi_snk

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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会思考的大鹅: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2017-03-13 15:56:58
1、首先,磷酸盐是HPLC中经常使用的缓冲液,应该不是造成压力高的主要原因,不确定你用的缓冲盐浓度多大,一般不建议超过50mmol,HPLC走缓冲盐溶液,一定要在使用前后,使用不含盐的溶液(例如10~20%的甲醇)充分冲洗。
2、其次,缓冲液的pH值呈弱碱性,长期使用的话,不知道色谱柱是否耐受;
3、最后,是否由于有机相甲醇比例多高,导致盐析出,建议优化流动性比例,例如:A相为缓冲盐:甲醇=8:2,B相为缓冲盐:甲醇=2:8
2楼2017-03-09 17:28:53
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会思考的大鹅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chuanqi_snk at 2017-03-09 17:28:53
1、首先,磷酸盐是HPLC中经常使用的缓冲液,应该不是造成压力高的主要原因,不确定你用的缓冲盐浓度多大,一般不建议超过50mmol,HPLC走缓冲盐溶液,一定要在使用前后,使用不含盐的溶液(例如10~20%的甲醇)充分冲洗 ...

嗯,我用的磷酸二氢铵是20mmol的,那我直接换成水可以吗?如果缓冲盐:甲醇=2:8是不是也太高容易盐析出啊
3楼2017-03-09 17:49:29
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以用乙酸盐或者磷酸代替

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4楼2017-03-09 18:00:43
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会思考的大鹅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wyy080214 at 2017-03-09 18:00:43
可以用乙酸盐或者磷酸代替

乙酸盐不爱析出吗?

发自小木虫Android客户端
5楼2017-03-13 08:05:37
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 会思考的大鹅 at 2017-03-13 08:05:37
乙酸盐不爱析出吗?
...

有机相比例不要太高就安全

发自小木虫Android客户端
6楼2017-03-13 17:08:51
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