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爱折腾的YJ

新虫 (初入文坛)

[求助] 提完质粒跑电泳 很奇怪 不是一条带 已有2人参与

重组质粒(puc19+一个能降解尼古丁的基因,大概3000kb吧),在大肠杆菌DH5α里。
然后划线培养、挑单菌落液体培养,提质粒,结果质粒提完跑电泳长这个样子,为什么啊 ,求大神帮助?

提完质粒跑电泳 很奇怪 不是一条带
质粒长这样.png
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borrysa

金虫 (正式写手)

质粒浓度高跑出来就这样,试着dilute一下跑跑看吧。

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-03-09 12:35:24
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
正常,提取质粒过程中部分质粒会发生断裂,所以产物中可能会有三种构象的质粒:超螺旋、开环、线性,三种构象质粒电泳时泳动速率不同,所以会有多条带,一般我们需要的是超螺旋构象的,这种构象的迁移最快。
2楼2017-03-09 11:32:15
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4楼2017-03-09 13:10:42
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爱折腾的YJ

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2017-03-09 11:32:15
正常,提取质粒过程中部分质粒会发生断裂,所以产物中可能会有三种构象的质粒:超螺旋、开环、线性,三种构象质粒电泳时泳动速率不同,所以会有多条带,一般我们需要的是超螺旋构象的,这种构象的迁移最快。

那这个质粒能不能往下继续用呢。我想把它酶切,然后取出目的DNA再重组到pet-28a去表达。这样能继续做吗?
5楼2017-03-10 12:34:36
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