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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 提完质粒跑电泳 很奇怪 不是一条带
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爱折腾的YJ

新虫 (初入文坛)

[求助] 提完质粒跑电泳 很奇怪 不是一条带 已有2人参与

重组质粒（puc19+一个能降解尼古丁的基因，大概3000kb吧），在大肠杆菌DH5α里。
然后划线培养、挑单菌落液体培养，提质粒，结果质粒提完跑电泳长这个样子，为什么啊 ，求大神帮助？

提完质粒跑电泳 很奇怪 不是一条带
质粒长这样.png
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1楼 2017-03-09 11:25:50
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
正常，提取质粒过程中部分质粒会发生断裂，所以产物中可能会有三种构象的质粒：超螺旋、开环、线性，三种构象质粒电泳时泳动速率不同，所以会有多条带，一般我们需要的是超螺旋构象的，这种构象的迁移最快。
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2楼2017-03-09 11:32:15
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borrysa

金虫 (正式写手)
质粒浓度高跑出来就这样,试着dilute一下跑跑看吧。

发自小木虫IOS客户端
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3楼2017-03-09 12:35:24
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jufayin


发自小木虫IOS客户端
4楼2017-03-09 13:10:42
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爱折腾的YJ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2017-03-09 11:32:15
正常，提取质粒过程中部分质粒会发生断裂，所以产物中可能会有三种构象的质粒：超螺旋、开环、线性，三种构象质粒电泳时泳动速率不同，所以会有多条带，一般我们需要的是超螺旋构象的，这种构象的迁移最快。

那这个质粒能不能往下继续用呢。我想把它酶切，然后取出目的DNA再重组到pet-28a去表达。这样能继续做吗？
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5楼2017-03-10 12:34:36
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 爱折腾的YJ at 2017-03-10 12:34:36
那这个质粒能不能往下继续用呢。我想把它酶切，然后取出目的DNA再重组到pet-28a去表达。这样能继续做吗？...

楼上解释正确。可以酶切，切完应该有清楚条带

发自小木虫IOS客户端
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
6楼2017-03-10 13:25:24
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爱折腾的YJ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by drwhoknowss at 2017-03-10 13:25:24
楼上解释正确。可以酶切，切完应该有清楚条带
...

切完就是我发的另一篇求助贴长得那样了， 不是两条带，而是弥散的带
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7楼2017-03-11 13:15:26
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