应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组表达
51/1返回列表
查看: 1023  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ssitxtgm

新虫 (小有名气)

[求助] 重组表达 已有1人参与

各位虫友，本人最近在做原核表达，用PET-28a，用了Nco I 和 bamHI  做双酶切，导入一段完整的171bp的ORF。图谱如下
由于存在完整的启动子和终止子，那么是否就是无法连接使用his-tag标签，如果是这样我在这段基因末端去掉终止子，使其连接后续28a基因连接上his-tag标签，是否会改变需要表达的这段蛋白。
由于需要表达的蛋白在6KD左右的小分子肽存在毒性，应该是包涵体形式存在，那么如何纯化已经表达的包涵体呢？请教下大家。

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-03-08 15:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-03-13 07:45:23
你说的应该是起始密码子和终止密码子吧，去掉密码子是可以和his标签融合表达的，一般不会改变蛋白的活性，现在有些酶可以切除蛋白标签的。关于你这么小的肽链如何纯化可以先按his标签的纯化方法试一下，但是有毒性的多肽，不知道菌体生长有没有影响，也不确定是否在包涵体内，毕竟是外源的基因表达。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2017-03-08 18:57:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssitxtgm

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2017-03-08 18:57:12
你说的应该是起始密码子和终止密码子吧，去掉密码子是可以和his标签融合表达的，一般不会改变蛋白的活性，现在有些酶可以切除蛋白标签的。关于你这么小的肽链如何纯化可以先按his标签的纯化方法试一下，但是有毒性的 ...

只是去掉终止密码子，使连接his标，我现在就是会怕影响表达，毕竟没做过，一做的话时间又得挺久。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-03-09 21:59:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

辉102526

新虫 (初入文坛)
6kD的蛋白有点小，但还可以做，形成包涵体，那就复性了

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-03-13 00:37:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssitxtgm

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 辉102526 at 2017-03-13 00:37:43
6kD的蛋白有点小，但还可以做，形成包涵体，那就复性了

意思是就按照我现行酶切位点不连接histag标签，然后使用盐酸胍或者尿素对包含体进行复兴提取嘛？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-03-13 10:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ssitxtgm 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +8 材料专硕调剂； 2026-02-28 9/450 2026-03-01 12:46 by 闭眼看蓝天
[考研] 0856材料专业298分有科研经历 硕士研究生调剂自荐信 +6 zyf上岸 2026-03-01 6/300 2026-03-01 12:43 by liqiongjy
[考研] 306分材料调剂 +3 chuanzhu川烛 2026-03-01 4/200 2026-03-01 12:32 by houyaoxu
[考研] 材料学调剂 +7 提神豆沙包 2026-02-28 9/450 2026-03-01 11:50 by 王伟要上岸啊
[考研] 材料类求调剂 +8 wana_kiko 2026-02-28 8/400 2026-03-01 11:44 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 高分子化学与物理调剂 +5 好好好1233 2026-02-28 9/450 2026-03-01 10:59 by fengyu211
[考研] 291分工科求调剂 +7 science饿饿 2026-03-01 8/400 2026-03-01 10:43 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭