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重组表达 已有1人参与
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各位虫友，本人最近在做原核表达，用PET-28a，用了Nco I 和 bamHI 做双酶切，导入一段完整的171bp的ORF。图谱如下 由于存在完整的启动子和终止子，那么是否就是无法连接使用his-tag标签，如果是这样我在这段基因末端去掉终止子，使其连接后续28a基因连接上his-tag标签，是否会改变需要表达的这段蛋白。 由于需要表达的蛋白在6KD左右的小分子肽存在毒性，应该是包涵体形式存在，那么如何纯化已经表达的包涵体呢？请教下大家。 @biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端 |
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原海亮
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-03-13 07:45:23
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你说的应该是起始密码子和终止密码子吧，去掉密码子是可以和his标签融合表达的，一般不会改变蛋白的活性，现在有些酶可以切除蛋白标签的。关于你这么小的肽链如何纯化可以先按his标签的纯化方法试一下，但是有毒性的多肽，不知道菌体生长有没有影响，也不确定是否在包涵体内，毕竟是外源的基因表达。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-03-08 18:57:12
3楼2017-03-09 21:59:57
4楼2017-03-13 00:37:43
5楼2017-03-13 10:45:29