| 查看: 2565 | 回复: 7 | ||
[求助]
未知基因的克隆与表达 已有2人参与
|
| 现在在做无忧树中某合酶基因的克隆，该基因序列在无忧树中没有报道过。现在根据已经报道了的香脂树同类酶基因序列（1800bp左右）设计引物做PCR，得到了3个大小不同的片段（800bp、1500bp和2000bp左右）。与参考序列相似度92%，是不是大概是对的？接下来要做原核表达，有一个让我很困惑的问题，就是我不知道扩增到的这几个片段是不是完整的，如何得到完整序列？如果不完整会不会表达不出来蛋白？刚开始做分子实验，还有很多不懂，请各位有经验的前辈指点一下，谢谢啦！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有226人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Nature ： DNA甲基化最新研究及常用研究方法
已经有43人回复
- 里程碑——揭秘癌症发生全过程
已经有16人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 报告基因
已经有6人回复
- 【求助/交流】如何降低，多克隆抗体非特异性？
已经有12人回复
- C130304,130305,130406的项目编号
已经有31人回复
绝对零度的笑
木虫 (正式写手)
- 应助: 41 (小学生)
- 金币: 3155.8
- 散金: 26
- 红花: 6
- 帖子: 899
- 在线: 95.8小时
- 虫号: 245021
- 注册: 2006-04-22
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
2楼2017-03-07 01:56:24
3楼2017-03-07 09:05:03
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
我没做过未知基因的扩增，想和楼主探讨一下。 关于是否是完整片段，楼主不妨分析一下已知其他物种的同工酶。 分析目的基因在哪一条染色体和哪个位置，分析基因上下游的功能，分析这一种酶家族的基因特点。 其他物种的同工酶活性中心至少应该是大致相同的，蛋白的性质应该相差不大，分析一下氨基酸序列，猜测一下各个区域的功能，亲水区、输水区，刚性结构等等。 参考其他酶的合成代谢机制，糖基化修饰、二硫键，是否有前体、二聚体、多聚体。。。 楼主表达蛋白的最终目的是什么？ 不妨建议楼主重点比对核心功能区域，平行表达已知物种的核心功能区域。 如果目的基因表达蛋白不完整，只要活性中心能够良好发挥作用，也有比较大的意义。 |
4楼2017-03-07 09:13:06
5楼2017-03-07 09:13:27
yoyoisagirl
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 63.9
- 散金: 20
- 帖子: 15
- 在线: 3.5小时
- 虫号: 5654273
- 注册: 2017-02-20
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
6楼2017-03-07 10:42:11
7楼2017-03-07 12:37:52
8楼2017-03-07 13:54:34