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蓝紫色忧郁

新虫 (初入文坛)

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专业: 化学生物学与生物有机化学

[求助] SDS-PAGE已有2人参与

我跑SDS-PAGE时，泳道总是出现成片的蓝色，难以脱掉，在跑胶的时候就可以看到分离胶部分，溴酚蓝指示前沿以上会出现黄色，这是为什么？
   另外，我的胶最下边出现两条带，我应该以哪一条作为溴酚蓝指示前沿，能否说明我的样品中有小分子量的蛋白？
   我用的是15%分离胶，5%浓缩胶，Marker的分力量范围是1.2KD-45KD，样品经过酸沉淀，PBS复溶，AKTA纯化。
   求各位大神指点！谢谢！

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1楼2017-03-06 15:14:39

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田生帅菜

新虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

5楼: Originally posted by 蓝紫色忧郁 at 2017-03-08 11:35:17
谢谢！
所有的试剂都试过用新的，结果还是一样。如果指示前沿看最前边，那是说我的样品里都有小分子量蛋白吗？...

你的溴酚蓝变黄是因为ph变化了，因为我看你写了，你是酸纯化的蛋白，再用PBS溶的，不知道你用akta怎么纯化的，即使过柱了，也可能酸性很大，所以溴酚蓝变黄。我猜测你这一板子上可能有纯化前，和纯化时多个时间点的收样，ph对纯化的很重要的，不知道你能否确定蛋白确实经过了纯化。你可以把你加样顺序写上。

发自小木虫IOS客户端