24小时热门版块排行榜    

查看: 1093  |  回复: 5

病理粉丝

新虫 (正式写手)

[求助] 求助如何比较不同的两种分子在RNA水平的表达差别?

想比较同一大类的两种分子在转录水平上的差别,其实通过realtime显示一个几乎没有而另一个比较多。但是如果想直接比较两种分子的表达水平的差别,怎样做好呢?
   因为引物是不一样的,其效率也是不一样的,直接拿realtime的结果说事是不行的吧?那有什么办法可以让审稿人认可,说确实是这种多那种少?
最好是比较公认的并且实验方法不负责的方法。
求各位分子生物学牛人指点一二,谢谢
回复此楼
让实验飞
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xihuanyanzi

银虫 (初入文坛)

realtime是可以的,前提是要和标准品进行标准化后才能比较。

发自小木虫IOS客户端
lalalalala
2楼2017-03-05 16:56:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

病理粉丝

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xihuanyanzi at 2017-03-05 16:56:52
realtime是可以的,前提是要和标准品进行标准化后才能比较。

谢谢,那么怎么规定标准品啊,具体是怎么的原理和步骤
让实验飞
3楼2017-03-05 18:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九生123

新虫 (小有名气)

real-time绝对定量。做两个样品的标准品,pcr扩增处两个基因,然后测浓度,梯度稀释,就有标准品了,按照相对分子质量可以知道mol数de。也可以用含有这个基因的质粒,定量mol数。

发自小木虫Android客户端
4楼2017-03-06 08:46:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

病理粉丝

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 九生123 at 2017-03-06 08:46:14
real-time绝对定量。做两个样品的标准品,pcr扩增处两个基因,然后测浓度,梯度稀释,就有标准品了,按照相对分子质量可以知道mol数de。也可以用含有这个基因的质粒,定量mol数。
...

谢谢您。可我还是有一些糊涂。1.我做的标准品做好梯度稀释以后是再和我的样本cDNA一起PCR是吗?那这两次的引物是不是得不一样才行,一样行吗?
2.制作我这个标准品的时候,是可以用基因组DNA来做吗?3.是算DNA片段的相对分子质量吗?这个得怎么算啊?4.有人这么干吗,您有相关的文献推荐吗?
问题有点多,不好意思,但真的很感谢您
让实验飞
5楼2017-03-06 18:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九生123

新虫 (小有名气)

当然一起pcr,而且是希望的引物,不同基因用不同引物。基因组不能定量吧。百度一下吧,比我说的详细

发自小木虫Android客户端
6楼2017-03-06 19:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 病理粉丝 的主题更新
信息提示
请填处理意见