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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助如何比较不同的两种分子在RNA水平的表达差别？
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病理粉丝

新虫 (正式写手)

[求助] 求助如何比较不同的两种分子在RNA水平的表达差别？

想比较同一大类的两种分子在转录水平上的差别，其实通过realtime显示一个几乎没有而另一个比较多。但是如果想直接比较两种分子的表达水平的差别，怎样做好呢？
   因为引物是不一样的，其效率也是不一样的，直接拿realtime的结果说事是不行的吧？那有什么办法可以让审稿人认可，说确实是这种多那种少？
最好是比较公认的并且实验方法不负责的方法。
求各位分子生物学牛人指点一二，谢谢
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让实验飞
1楼 2017-03-05 16:24:09
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xihuanyanzi

银虫 (初入文坛)
realtime是可以的，前提是要和标准品进行标准化后才能比较。

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lalalalala
2楼2017-03-05 16:56:52
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病理粉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xihuanyanzi at 2017-03-05 16:56:52
realtime是可以的，前提是要和标准品进行标准化后才能比较。

谢谢，那么怎么规定标准品啊，具体是怎么的原理和步骤
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让实验飞
3楼2017-03-05 18:16:08
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九生123

新虫 (小有名气)
real-time绝对定量。做两个样品的标准品，pcr扩增处两个基因，然后测浓度，梯度稀释，就有标准品了，按照相对分子质量可以知道mol数de。也可以用含有这个基因的质粒，定量mol数。

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4楼2017-03-06 08:46:14
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病理粉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 九生123 at 2017-03-06 08:46:14
real-time绝对定量。做两个样品的标准品，pcr扩增处两个基因，然后测浓度，梯度稀释，就有标准品了，按照相对分子质量可以知道mol数de。也可以用含有这个基因的质粒，定量mol数。
...

谢谢您。可我还是有一些糊涂。1.我做的标准品做好梯度稀释以后是再和我的样本cDNA一起PCR是吗？那这两次的引物是不是得不一样才行，一样行吗？
2.制作我这个标准品的时候，是可以用基因组DNA来做吗？3.是算DNA片段的相对分子质量吗？这个得怎么算啊？4.有人这么干吗，您有相关的文献推荐吗？
问题有点多，不好意思，但真的很感谢您
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让实验飞
5楼2017-03-06 18:42:58
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九生123

新虫 (小有名气)
当然一起pcr，而且是希望的引物，不同基因用不同引物。基因组不能定量吧。百度一下吧，比我说的详细

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6楼2017-03-06 19:09:54
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