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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » in fusion同源臂重组时，同源臂最多可以多长？
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小汰宝

金虫 (正式写手)

[交流] in fusion同源臂重组时，同源臂最多可以多长？ 已有4人参与

现在要把一段基因构建到目标载体上，并且给基因前面加上T7启动子＋lac操纵子＋RBS.

目前想到比较稳妥的办法就是把基因构建到含有T7＋lac操纵子＋RBS的质粒上(比如petdute)，然后再把一整段T7＋lac＋RBS＋基因一起P下来，再连接一次到目标载体。

但是也有个想法，不知道能不能实现:就是把基因从最初载体上P下来的时候，前端就加上T7＋lac操纵子＋RBS的同源臂，并且环P目标载体的时候也给对应的那端加上这个同源臂，实现一步连接。

如此一来，引物为了包括这段同源臂，要在结合区域20bp以外，再加上85bp同源臂，总共100多bp了，不知道这么长的引物和同源臂有没有问题？

snapgene中模拟过了，是可以的，但是实验室没人用过这么长的引物，所以求教~~

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1楼 2017-03-03 10:20:06
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-05 08:57:40
20bp的同源臂没有问题，如果了解原理的话， in fusion方法同源重组克隆，同源臂越长越好，当然适当长度一般超过15bp即可。100bp长度的引物也还好，就是合成略贵。
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2017-03-05 02:20:08
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firefly22

禁虫 (小有名气)
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3楼2017-03-05 09:36:18
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)
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额，推荐看一篇文献Characterization of Stilbene Synthase Genes in Mulberry ( Morus atropurpurea ) and Metabolic Engineering for the Production of
Resveratrol in Escherichia coli。

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A right way maybe not a good way！
4楼2017-03-05 13:17:44
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burma9

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2017-03-05 02:20:08
20bp的同源臂没有问题，如果了解原理的话， in fusion方法同源重组克隆，同源臂越长越好，当然适当长度一般超过15bp即可。100bp长度的引物也还好，就是合成略贵。

您好，我看Infusion 同源重组说明书上写着同源臂是15bp,，同源臂到25bp的话，也可以吗？
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5楼2019-01-03 09:12:53
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