24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3652)
>虫友互识 (825)
>论文投稿 (263)
>休闲灌水 (220)
>导师招生 (164)
>基金申请 (146)
>文献求助 (136)
>硕博家园 (99)
>考博 (78)
>公派出国 (71)
>博后之家 (70)
>教师之家 (61)
>考研 (52)
>论文道贺祈福 (41)
>招聘信息布告栏 (39)
>找工作 (33)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小汰宝

金虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1382.7
散金: 216
红花: 3
帖子: 577
在线: 44.9小时
虫号: 3897142
注册: 2015-05-29
专业: 生物化工与食品化工

[交流] in fusion同源臂重组时，同源臂最多可以多长？已有4人参与

现在要把一段基因构建到目标载体上，并且给基因前面加上T7启动子＋lac操纵子＋RBS.

目前想到比较稳妥的办法就是把基因构建到含有T7＋lac操纵子＋RBS的质粒上(比如petdute)，然后再把一整段T7＋lac＋RBS＋基因一起P下来，再连接一次到目标载体。

但是也有个想法，不知道能不能实现:就是把基因从最初载体上P下来的时候，前端就加上T7＋lac操纵子＋RBS的同源臂，并且环P目标载体的时候也给对应的那端加上这个同源臂，实现一步连接。

如此一来，引物为了包括这段同源臂，要在结合区域20bp以外，再加上85bp同源臂，总共100多bp了，不知道这么长的引物和同源臂有没有问题？

snapgene中模拟过了，是可以的，但是实验室没人用过这么长的引物，所以求教~~

发自小木虫Android客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2017-03-03 10:20:06

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 2725.6
散金: 5
红花: 16
帖子: 990
在线: 147.4小时
虫号: 1521077
注册: 2011-12-02
性别: GG
专业: 植物生理与生化

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

额，推荐看一篇文献Characterization of Stilbene Synthase Genes in Mulberry ( Morus atropurpurea ) and Metabolic Engineering for the Production of
Resveratrol in Escherichia coli。

发自小木虫IOS客户端