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wandoumuche1

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质电泳 已有2人参与

做蛋白质电泳为什么只有marker有带，样品都没有带，是不是提取的蛋白质上样前要处理（纯化）下，怎么处理呢？
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1楼 2017-03-01 15:00:47
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bbass533

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2017-03-01 15:40:07
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wandoumuche1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbass533 at 2017-03-01 15:40:07
额，请问你染色了么= =
上样一般不需要纯化，跑完胶显色之后看条带，不纯的话再纯化

染了考马斯亮蓝过夜。氯醋酸—丙酮沉淀法
　　1、在液氮中研磨叶片
　　2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
　　3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
　　4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
　　5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
　　药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml                                       
老师叫我参照此法处理下蛋白质，我都看不懂

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3楼2017-03-01 15:53:28
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bbass533

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2017-03-01 16:37:32
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-15 09:19:46
你所谓的蛋白质电泳指的是SDS-PAGE电泳吗？如果是的话，那它的步骤你在网上都能找得到的。你说你有Marker条带，是不是你用的是预染的呢，如果经考染、脱色，你的样品都没有带，没有一个带的话，就说明你提取的过程有问题，不然不会是空带。
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
5楼2017-03-14 22:43:58
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mistermo

铁虫 (初入文坛)
是不是分子量太小，跑出胶了，试试浓度高点的浓缩胶

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6楼2017-03-16 06:33:14
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mistermo

铁虫 (初入文坛)
是分离胶，不是浓缩胶

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7楼2017-03-16 06:33:53
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