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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 求助！！！急！！α-葡萄糖苷酶抑制实验空白组始终不显色，可能是什么原因？
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清雅桃子

金虫 (小有名气)

[求助] 求助！！！急！！α-葡萄糖苷酶抑制实验空白组始终不显色，可能是什么原因？ 已有5人参与

112 μL 磷酸钾缓冲液 (pH 6.8)，加入 0.2 U/mL α-葡萄糖苷酶 20 μL，样本溶液 8 μL，37 ℃ 恒温 15 min 后加入 2.5 mmol/L PNPG 20μL，37 ℃ 恒温反应 15 min。再加入 0. 2 mol/L的Na2CO3水溶液 80 μL，于 405 nm 波长下测 A 值

酶，pnpg均是新买的，所有试剂重新配过，1mol/L的Na2CO3也试过，反应时间也延长了，始终没有颜色，希望做过的同学帮忙指点迷津，万分感谢！！！
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1楼 2017-02-28 19:39:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hydros

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
猜测可能是酶的浓度太低。不同批次不同来源的酶活度不一样，建议酶的用量加大到1 U/ml试试
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清雅桃子
3楼2017-03-02 09:35:26
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矮矬穷笨傻

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我当时一次成功的。60摄氏度烘箱，还有PH和酶浓度的问题，多试试。ph4的适合37摄氏度，ph6.8的60摄氏度。多看文献哦。我两年前做过，显色着呢
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17楼2020-07-02 17:15:26
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普通回帖

清雅桃子

金虫 (小有名气)
别沉水了啊
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2楼2017-03-01 09:35:56
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清雅桃子

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hydros at 2017-03-02 09:35:26
猜测可能是酶的浓度太低。不同批次不同来源的酶活度不一样，建议酶的用量加大到1 U/ml试试

上周刚到的Sigma的酶，我看几乎所有的酶活都是用的0.2U的，请问酶在用之前需要37度孵育一下吗，谢谢啦
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4楼2017-03-02 10:20:29
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hydros

金虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 清雅桃子 at 2017-03-02 10:20:29
上周刚到的Sigma的酶，我看几乎所有的酶活都是用的0.2U的，请问酶在用之前需要37度孵育一下吗，谢谢啦...

不需要

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5楼2017-03-02 11:10:14
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1505363338

新虫 (初入文坛)
问一下，你的问题解决了吗？我也碰到了一样的问题

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6楼2017-03-17 16:54:28
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g2peng

新虫 (小有名气)
请问解决没，我们也是这种问题，开始买的国产的酶，后来换成sigma的，浓度也试验了几种，都没反应，现在不知是什么问题

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7楼2017-04-26 18:18:20
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ddrr1992

新虫 (初入文坛)
请问解决没有啊？我也在做这个，也是发现这个问题，酶浓度增加到14u/mL也没有用，就是不显色
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8楼2017-05-27 12:19:26
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吴月芽2009

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

60 μL 磷酸钾缓冲液 (pH 6.8)，加入 0.2 U/mL α-葡萄糖苷酶 20 μL，样本溶液10 μL，37 ℃ 恒温 15 min 后加入 2.5 mmol/L PNPG 20μL，37 ℃ 恒温反应 30 min。再加入 0. 2 mol/L的Na2CO3水溶液 80 μL，于 405 nm 波长下测 A 值

2 U/mL α-葡萄糖苷酶 20 μL，也试过，反应时间也延长了，始终没有颜色，希望做过的同学帮忙指点迷津，万分感谢！！
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9楼2018-03-15 17:23:06
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1195765212

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by ddrr1992 at 2017-05-27 12:19:26
请问解决没有啊？我也在做这个，也是发现这个问题，酶浓度增加到14u/mL也没有用，就是不显色

我也遇到了这个问题，请问你解决了吗😭

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2018-06-04 17:12:24
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