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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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绿松石6727

新虫 (小有名气)

[求助] 双酶切 已有2人参与

提的蛋白表达载体质粒pet30a，浓度为1200ng/ul，下图为酶切图，中间为对照的没有酶切的质粒，最后一个为marker，对照左右两个酶切，酶为bgl2,和nco1，切质粒2ug，切3个小时，但是全部为涂抹带，问题出在哪里呢？质粒的问题？

双酶切


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1楼 2017-02-27 17:55:19
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
你的对照质粒跑出来感觉就有点奇怪，最下面那个条带是什么？

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2楼2017-02-28 00:45:52
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困困的黄瓜

铁虫 (著名写手)
好久没看了～明天再想吧

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3楼2017-02-28 01:09:48
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mochenmi at 2017-02-28 00:45:52
你的对照质粒跑出来感觉就有点奇怪，最下面那个条带是什么？

是没有消化的RNA？

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4楼2017-02-28 09:38:03
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PET30A本来就是低拷贝表达型质粒，你这质粒估计50NG都没有，我一般都是跑六管质粒，把质粒胶回收纯化的只有一条带在酶切的，你这质粒很难酶切，全RNA。
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采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2017-02-28 16:33:40
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风见四叶草

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你测的质粒浓度1200ng/ul，这么高的浓度不可能质粒条带那么暗的。应该全是你最下边那个未知条带的浓度。
另外，你用的什么公司的酶，要切3小时那么久
你用的质粒是低拷贝的，建议换好的试剂盒提取。再重新做一次吧，祝好
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6楼2017-02-28 19:42:41
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 风见四叶草 at 2017-02-28 19:42:41
你测的质粒浓度1200ng/ul，这么高的浓度不可能质粒条带那么暗的。应该全是你最下边那个未知条带的浓度。
另外，你用的什么公司的酶，要切3小时那么久
你用的质粒是低拷贝的，建议换好的试剂盒提取。再重新做一次吧 ...

谢谢～

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7楼2017-03-01 16:36:28
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 781055707 at 2017-02-28 16:33:40
PET30A本来就是低拷贝表达型质粒，你这质粒估计50NG都没有，我一般都是跑六管质粒，把质粒胶回收纯化的只有一条带在酶切的，你这质粒很难酶切，全RNA。

谢谢啦

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8楼2017-03-01 16:36:50
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