应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切
81/1返回列表
查看: 1218  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

绿松石6727

新虫 (小有名气)

[求助] 双酶切 已有2人参与

提的蛋白表达载体质粒pet30a，浓度为1200ng/ul，下图为酶切图，中间为对照的没有酶切的质粒，最后一个为marker，对照左右两个酶切，酶为bgl2,和nco1，切质粒2ug，切3个小时，但是全部为涂抹带，问题出在哪里呢？质粒的问题？

双酶切


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-02-27 17:55:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mochenmi

铜虫 (小有名气)
你的对照质粒跑出来感觉就有点奇怪，最下面那个条带是什么？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-02-28 00:45:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

困困的黄瓜

铁虫 (著名写手)
好久没看了～明天再想吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-02-28 01:09:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mochenmi at 2017-02-28 00:45:52
你的对照质粒跑出来感觉就有点奇怪，最下面那个条带是什么？

是没有消化的RNA？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-02-28 09:38:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PET30A本来就是低拷贝表达型质粒，你这质粒估计50NG都没有，我一般都是跑六管质粒，把质粒胶回收纯化的只有一条带在酶切的，你这质粒很难酶切，全RNA。
赞一下(2人) 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2017-02-28 16:33:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风见四叶草

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你测的质粒浓度1200ng/ul，这么高的浓度不可能质粒条带那么暗的。应该全是你最下边那个未知条带的浓度。
另外，你用的什么公司的酶，要切3小时那么久
你用的质粒是低拷贝的，建议换好的试剂盒提取。再重新做一次吧，祝好
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2017-02-28 19:42:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 风见四叶草 at 2017-02-28 19:42:41
你测的质粒浓度1200ng/ul，这么高的浓度不可能质粒条带那么暗的。应该全是你最下边那个未知条带的浓度。
另外，你用的什么公司的酶，要切3小时那么久
你用的质粒是低拷贝的，建议换好的试剂盒提取。再重新做一次吧 ...

谢谢～

发自小木虫Android客户端
回复此楼
7楼2017-03-01 16:36:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿松石6727

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 781055707 at 2017-02-28 16:33:40
PET30A本来就是低拷贝表达型质粒，你这质粒估计50NG都没有，我一般都是跑六管质粒，把质粒胶回收纯化的只有一条带在酶切的，你这质粒很难酶切，全RNA。

谢谢啦

发自小木虫Android客户端
回复此楼
8楼2017-03-01 16:36:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 绿松石6727 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭