应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 连接的问题
51/1返回列表
查看: 767  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)

[交流] 求助 连接的问题

各位大侠,最近做连接时,基因与载体老是连不上,是怎么回事,连接酶也换了好几种,还是不行,转化到大肠杆菌后,提到的质粒都是空载体,或者条带不对!!
     有老师说是连接前的双酶切效率低的问题,可怎样提高酶切效率啊?而且酶切后检测的片段都是正确的,回收时就只有一条目的带,以前做实验也没遇到过这种问题.
     另外,我曾试着将载体连到T载体上,这样连接切后再连的效率就比较高了,但听说连到T载体上会使基因发生移码突变,表达的蛋白活性低甚至没有活性,不知是否对.现在我也不敢往T载体上连了
     请问各位大侠,有何高招,谢谢了!!
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-12-21 13:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

csx2044

至尊木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小猫三两只(金币+3,VIP+0):非常感谢
建议：连接后先进行DNA测序，看测序结果后才能判定，祝好运。我做这部分实验的时候就比较lucky，一周内就得到克隆了。不要着急，心态平稳才会有好的结果。
赞一下(4人) 回复此楼
我为虫虫，虫虫为我
3楼2008-12-21 22:29:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★ ★
小猫三两只(金币+2,VIP+0):谢谢了，可是测序结果也会有不准确的啊
连接完测个序 突变不突变就知道了
赞一下(4人) 回复此楼
细推物理须行乐。
2楼2008-12-21 18:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)
非常感谢虫友的帮助，我想再问一下，当连接比较困难时，有没有改进的一些方法可以提高连接效率，我指的是不同于平时的做法。
昨天连接后提的质粒酶切后观察，好像基因连上了，因为有那个基因的带，但是再有该重组质粒为模板PCR扩增基因时，又没有基因的带了，但是同时做的阳性对照是有带的。
赞一下 回复此楼
4楼2008-12-22 11:43:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

suguang

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小猫三两只(金币+3,VIP+0):去磷酸化也做过,效果也不是太好
1、增大连接载体和目的基因的浓度和反应体积、时间，适当加大酶量
2、适当增大目的基因与载体的摩尔比例
3、载体酶切后去磷处理
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2008-12-22 15:19:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+5 David1982 2026-10-13 8/400 2026-10-14 21:38 by lhw_GPA4.0
[硕博家园] 中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理 +3 sujiner 2026-10-08 4/200 2026-10-14 20:40 by qicaiyun
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +3 xqy2009 2026-10-13 3/150 2026-10-14 20:17 by 43358052
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭